[求助]关于RNA琼脂糖电泳

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标题:[求助]关于RNA琼脂糖电泳

小妖儿[使用道具]
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发表于 2011-10-21 13:22 资料个人空间短消息加为好友

小中大

[求助]关于RNA琼脂糖电泳

最近做RT PCR，提取RNA后想看一下RNA质量如何，可是用园子里推荐的普通胶跑RNA怎么也跑不出漂亮的图。这两天干脆只有泳道，看不到条带了。讨教大家有没有绝招呀！期待。。。。。我用的是1% 1*TAE，120v电压，10分钟

jude[使用道具]
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发表于 2011-10-21 13:22 资料个人空间短消息加为好友

小中大

一般来说，如果没有特别的用处，仅做RT-PCR，用普通的胶跑RNA检测一下质量是完全可以的。跑不出漂亮的图，两方面的原因：
1.本身RNA提的质量就不高
2.电泳时，最好使用新胶，新的电泳缓冲液（我曾经用过旧的胶，结果本来效果很好的RNA在跑的时候就降解了，RNA酶污染的太厉害了）

希望对你有所帮助

小妖儿[使用道具]
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发表于 2011-10-21 13:23 资料个人空间短消息加为好友

小中大

谢谢！我怀疑我上样时，将RNA样品点在一次性手套上，与EB和上样液混合，这样是不是可能导致RNA分解。你是怎样处理的？

冰儿0109[使用道具]
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发表于 2011-10-21 13:23 资料个人空间短消息加为好友

小中大

谢谢！我怀疑我上样时，将RNA样品点在一次性手套上，与EB和上样液混合，这样是不是可能导致RNA分解。你是怎样处理的？

================

谁让你这样上样的？？
EB放在上样液？？

你强啊。

小妖儿[使用道具]
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发表于 2011-10-21 13:24 资料个人空间短消息加为好友

小中大

难道不对吗？请指教！
不是我强，我很弱，才会作不出来。

锤子[使用道具]
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发表于 2011-10-21 13:24 资料个人空间短消息加为好友

小中大

1XTBE or 1X TAE rinse the tank first

use new 1*TAE or 1XTBE fill the tank
use the buffe to prepare the 1% agrose gel and the EB is added at this time in the gel
use the DNA loading dye to mix with your 1-2ug RNA sample per lane per sample
( on parafilm or in tube)
use correct voltage( according to your gel size and tank size, 15-20 well gel, 80-100v, if 6-8 well gel 50v)

Check from time to time, don't let the RNA run out of the gel.

小妖儿[使用道具]
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发表于 2011-10-21 13:25 资料个人空间短消息加为好友

小中大

究竟RNA电泳时EB与样品混合还是和跑DNA一样加入胶里？有两种说法

楚留臭[使用道具]
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发表于 2011-10-21 13:25 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我们实验室的EB加在了胶里，RNA只与上样缓冲液混合的，1％TAE，160-170v20min，效果很好的

04906[使用道具]
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发表于 2011-10-21 13:25 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我提的RNA用普通胶跑电泳挺好的，我用的是TBE，反复用好多次，电泳槽里的TBE变快深兰色我还在用，而且那块胶也是反复用，不过是在同一天内吧，一般我一天提两次嘛，配TBE的只是一般的四蒸水而已，跑的条带一样很清晰。我的同学用的是生工的TRIZOL，结果跑得也还好，只是降解特别厉害，我用的是Ivitrogen的，所以条带多数很漂亮，所以我觉得电泳跑的好不好不是胶的问题，也不是DEPC水的问题，是RNA本身提取的质量问题。

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发表于 2011-10-21 13:28 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我觉得是本身RNA提取的质量问题。

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