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标题:[求助]半定量PCR ！

bananapeople[使用道具]
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发表于 2011-10-21 15:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]半定量PCR ！

[求助]半定量PCR ！


我目前正在作半定量PCR,以b-actin为内参，想请教内参的PCR循环次数是否应该与目的片断一致，如果目的片断需要较多的循环次数，而内参已经到达平台期，该怎么办呢！请多多指教。
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发表于 2011-10-21 15:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你在同一管里扩啊
可以放在不同的管里啊 分别扩
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发表于 2011-10-21 15:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我是放在不同的管中进行反应的，两者的循环次数是不是一定要一致啊。
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发表于 2011-10-21 15:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我是放在不同的管中进行反应的，两者的循环次数是不是一定要一致啊。
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大桃子同学[使用道具]
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发表于 2011-10-21 15:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不同管扩增比较好，两次的扩增循环数不一定要一致。
应该各自摸索不同的平台期。一般，看家基因肯定在25－30个循环甚至更少就已经达到平台期，而你的目的基因就不一定了。摸索出各自的平台期确定循环参数之后，可以在同一台PCR仪上同时扩增，达到看家基因的循环数时，先取出看家基因的管子，然后继续目的基因的PCR。电泳时将样品混合后跑胶就OK了。当然，还有其他方法，你再查查资料。
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bananapeople[使用道具]
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发表于 2011-10-21 16:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢！请问是否两者都应该在平台期才能进行比较，确定平台期是否是将同样的PCR反应体系进行不同循环次数反应，然后比较产物，指数扩增期产物与循环次数应该是线性关系，是这样嘛  
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发表于 2011-10-21 16:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
指数扩增期产物与循环次数应该是线性关系，是这样嘛 不是 是指数关系
请问是否两者都应该在平台期才能进行比较 不是 要在两者达到平台期以前比较
确定平台期是否是将同样的PCR反应体系进行不同循环次数反应，然后比较产物 是的  
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金手指[使用道具]
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发表于 2011-10-21 16:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
一般b actin需要25到28个循环 你随便挑一下 再作个30个循环的对比一下
就这么简单 copy少的就加两个循环 依此类推
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bananapeople[使用道具]
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发表于 2011-10-21 16:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你的意见是目的片段如果COPY少就加循环，内参在25-28间选择，是这个意思吗？
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bananapeople[使用道具]
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发表于 2011-10-21 16:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你的意见是目的片段如果COPY少就加循环，内参在25-28间选择，是这个意思吗？
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