【讨论帖】用HILIC柱子做了下氨基糖苷类，发现有...

最新回复

• feima+ (2016-3-24 11:35:35)

  出峰时间有点后吧。。。

• 8princess8 (2016-3-24 11:35:57)

  QUOTE:

  原帖由 feima+ 于 2016-3-24 11:35 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  出峰时间有点后吧。。。

  是有点后了，现在在重新摸索方法！

• remonte (2016-3-24 11:36:22)

  样品配制的溶剂可能有影响，而且影响还不小；洗针液是否要更换；重新设置梯度；换Amide柱试试

• 8princess8 (2016-3-24 11:36:41)

  QUOTE:

  原帖由 remonte 于 2016-3-24 11:36 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  样品配制的溶剂可能有影响，而且影响还不小；洗针液是否要更换；重新设置梯度；换Amide柱试试

  样品是用初始流动相来定容的，洗针液每天都会更换，梯度都设置过好多遍了，还是走这样，很费解，不过氨基糖苷类药物真的是不好做！

• remenb (2016-3-24 11:37:00)

  回溶液加1%FA试试看
  另外这几个你去看paper 峰都不会太完美

• 8princess8 (2016-3-24 11:37:30)

  QUOTE:

  原帖由 remenb 于 2016-3-24 11:37 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  回溶液加1%FA试试看
  另外这几个你去看paper 峰都不会太完美

  1%FA的ph那是很低的了，柱子的ph承受能力好像没那么低！谢谢你的建议！
  回去测测ph看看，不过这柱子比c18的好多了，最起码不会一次性一个峰就出完！

• kewanqi2011 (2016-3-24 11:37:46)

  从图来看,象是梯度走的快了点.
  有两种可能, 1)是梯度在8分钟后升的太快了.2)是在洗柱后,平衡时间不够.
  而后一种情况的可能性比较高.

• queen (2016-3-24 11:38:00)

  你的这些霉素相应重现性好么？

• 8princess8 (2016-3-24 11:38:25)

  QUOTE:

  原帖由 kewanqi2011 于 2016-3-24 11:37 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  从图来看,象是梯度走的快了点.
  有两种可能, 1)是梯度在8分钟后升的太快了.2)是在洗柱后,平衡时间不够.
  而后一种情况的可能性比较高.

  谢谢专家指点！
  我们平衡时间为了保险起见用了6min。我再试着调下条件先！

• 8princess8 (2016-3-24 11:39:06)

  QUOTE:

  原帖由 queen 于 2016-3-24 11:38 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  你的这些霉素相应重现性好么？

  因为这些霉素刚做没多久，重现性暂时来看还是可以的！

• one (2016-3-24 11:44:23)

  看图明显是色谱柱问题，换个柱子试试吧。

• 8princess8 (2016-3-24 11:44:45)

  QUOTE:

  原帖由 one 于 2016-3-24 11:44 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  看图明显是色谱柱问题，换个柱子试试吧。

  - -！这根柱子是新的哦！还冲了一个晚上的！

• 8princess8 (2016-3-24 11:56:49)

  1%FA的ph那是很低的了，柱子的ph承受能力好像没那么低！谢谢你的建议！
  回去测测ph看看，不过这柱子比c18的好多了，最起码不会一次性一个峰就出完！
  
  =================================
  
  还好啦 FA没强到那样
  不过回溶液可能严重影响峰型，，
  最近follow一篇paper试了一下
  大概了解了。。。
  他们主要用 mixed mode column
  而且主要靠的并不是hilic而是WCX
  所以这类用的条件都很tricky
  gradient到90%的水相～～
  这在一般HILIC很少见

• 8princess8 (2016-3-24 11:57:39)

  看图明显是色谱柱问题，换个柱子试试吧。
  
  ========================================
  
  No
  这类化合物很难搞
  以往都用C18搭ion pairing buffer
  现在接质朴有些人开始改用HILIC的column
  只是还是不好搞
  有retent但是峰型不保证能看 。。。。。

• 8princess8 (2016-3-24 11:58:04)

  试过加了5ml的FA，PH大概在2点多。90%的水相对hilic好像不怎么好！不过到现在有几个物质还没完全分开！

• 8princess8 (2016-3-24 11:58:34)

  氨基糖苷类药物我们要做庆大霉素，安普霉素，丁胺卡那霉素，链霉素，新霉素！
  丁胺卡那霉素和链霉素的峰都出得不错，而且还分得很开，但是庆大霉素的峰就很奇怪了~~~~
  流动相a是10mm乙酸胺+0.1%甲酸，b相是0.1%甲酸乙腈
  先来张mrm图
  

  
  2013052718011020.png

• 8princess8 (2016-3-24 11:58:51)

  下面是庆大霉素的提取离子图

  
  2013052718011329.png

• 8princess8 (2016-3-24 11:59:20)

  还有安普霉素的峰也是十分诡异的

  
  2013052718011976.png

• 8princess8 (2016-3-24 11:59:59)

  - -！请问各位大侠到时是哪里出错的呢？就是有几种药做不出啊，我也很郁闷啊！

• iii_ii (2016-3-24 12:00:17)

  尝试不同的PH的流动相，不同的色谱柱，多尝试下，有时候对梯度也很敏感……