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标题:【求助】蛋白确实有磷酸化用质谱做的话用什么质谱

dadaai[使用道具]
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发表于 2016-3-26 10:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】蛋白确实有磷酸化用质谱做的话用什么质谱

各位大神：
       我想做一下病毒中某一蛋白的磷酸化位点，之前已有人用32P放射显影证明该蛋白确实有磷酸化。请问下，我用质谱做的话该用什么质谱？最重要的是我到底有没有必要纯化该蛋白再去做质谱？如果只是用SDS-PAGE分离一下，可不可以满足质谱磷酸化位点鉴定？感谢大家的帮忙，跪谢。
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danzi[使用道具]
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发表于 2016-3-26 10:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

SDS-PAGE染色后能确定目标蛋白条带，可以不用纯化蛋白，直接切胶条消化打质谱。
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qinqinai[使用道具]
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发表于 2016-3-26 10:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

那会不会有蛋白信号覆盖的问题？好像有文献这么说
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小妖精@[使用道具]
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发表于 2016-3-26 10:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

那会不会有蛋白信号覆盖的问题？好像有文献这么说
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燕子@[使用道具]
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发表于 2016-3-26 10:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

所以要看你的目标蛋白的丰度、胶上的位置是否还有很多杂蛋白。
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yazi[使用道具]
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发表于 2016-3-26 10:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

还想问下：打质谱前，蛋白染色的试剂要不要求色谱或质谱级？谢谢
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无怨无悔[使用道具]
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发表于 2016-3-26 10:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

染色时不用。切胶条后用的试剂需要。
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