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标题:[求助]我的PCR跑不出带,但点样孔是亮的,这是怎么回事啊?

66小飞侠[使用道具]
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发表于 2011-10-22 16:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]我的PCR跑不出带,但点样孔是亮的,这是怎么回事啊?

[求助]我的PCR跑不出带,但点样孔是亮的,这是怎么回事啊?


我最近跑PCR一直做得不好,干脆我把所有的试剂都换了新的,DNA也是重新稀释的,可还是P不出来,以前都可以的,现在却不行了,今天又做了一天还是没有带,但点样孔却是亮的,这是怎么回事呢?这个国庆节真是郁闷啊!
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#黄药师#[使用道具]
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发表于 2011-10-22 16:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
点样孔是亮的是蛋白质
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发表于 2011-10-22 16:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
点样孔应该是基因组DNA。
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发表于 2011-10-22 16:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
首先看loading buffer里的溴酚兰和二甲苯氰跑没跑出点样孔，如果是的话，点样孔里的肯定不是pcr产物。如果以前能跑出来，那只能找试剂和pcr条件的问题了。引物没问题吗？可以把引物用page或wave检测一下。
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笔笔[使用道具]
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发表于 2011-10-22 16:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
点样孔亮的是基因组DNA，可能是模板浓度太大，重新测一下DNA浓度和纯度；或者是引物发生了交联，换新引物；最后还不行，换一台PCR仪试试。  
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发表于 2011-10-22 16:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
引物没有问题,试剂也是刚换的新的,都没有问题.也许是DNA浓度高了吧,我再降低一下DNA用量试试.谢谢各位!  
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发表于 2011-10-22 16:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我种情况我遇到过,.99%的可能性是模板浓度太高多导致的
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发表于 2011-10-22 16:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我把模板DNA浓度降低了，还是跑不出来。然后我又换以前做得很好的模板再做也没有带，真不知是怎么回事！
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发表于 2011-10-22 16:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我最近也碰到类似问题，最后发现是因为PCR产量太低所致。你可以更换PCR条件，然后再跑电泳试试。（本人是绝对的新手，以上意见仅供参考！）
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二丫头466[使用道具]
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发表于 2011-10-22 16:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我最近也碰见过类似情况,减少了模板量,多增加几次循环,结果就跑出条带了.应该是模板浓度太高了引起的.你试试
另外,建议你加一个阳性对照,检查一下你的试剂及PCR循环参数有没有问题
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