小中大谢谢楼上的回答。
还有几个问题请问各位：
我作的是PT-PCR，且到目前为止我一直将内参和目的基因放在同管内扩增，35个以上的循环目的基因和内参都能扩增出来，且35个循环和40个循环比较，40个循环的目的基因和内参都比35个循环的要亮，这能否说明35个循环内参和目的基因都没达到平台期？
如果把内参和目的基因分开扩，相同的反应条件，内参做25循环，目的基因做35个循环，这样行不行？
我看见本版中有人介绍说，将目的基因扩增10个循环后加入内参的引物，具体该如何操作?将PCR仪暂停?能将EP管取出来吗？因为我的引物上样量为0.5ul,加样后需要混匀，离心。如果可以将EP管取出来，是否加样时仍在冰上操作？另外，加入内参引物后，循环开始前的94℃预变性5分钟就取消了吗？
盼指教，谢谢！
