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标题:【求助】PCR产物直接测序和克隆后测序的区别

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发表于 2016-4-4 22:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】PCR产物直接测序和克隆后测序的区别


请问PCR产物直接测序和PCR产物克隆后测序有什么区别？两种方法分别在什么情况下应用？
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baidukk[使用道具]
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发表于 2016-4-4 22:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

不好意思，楼上几位，最大的区别不是你们说的，前面的一些碱基，也可以测序获得，如果反向不够长的话，可以设计通用引物测序，可以得到完整的序列。
最主要的区别是：直接测序是测你总的PCR产物，是总的情况的反应，不能看出一些量少的东西。但是克隆测序，一个克隆只是你PCR产物中的一条连。就是你克隆进去并逃到的一种情况。不能反应你PCR的总情况。
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发表于 2016-4-4 22:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

其实最主要的区别就是看你是否需要完整、可信的序列了
PCR产物直接测序时 前30～50bp和终止前的序列都是无法正确读取的
如果克隆到载体上 用通用引物测序 就可以测一段载体的序列避免这个问题 从而获得完整的序列信息
仅供参考
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发表于 2016-4-4 22:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

载体克隆回新增一部分突变。
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cbou876[使用道具]
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发表于 2016-4-4 22:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

不好意思，楼上几位，最大的区别不是你们说的，前面的一些碱基，也可以测序获得，如果反向不够长的话，可以设计通用引物测序，可以得到完整的序列。
最主要的区别是：直接测序是测你总的PCR产物，是总的情况的反应，不能看出一些量少的东西。但是克隆测序，一个克隆只是你PCR产物中的一条连。就是你克隆进去并逃到的一种情况。不能反应你PCR的总情况。
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发表于 2016-4-4 22:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

那么我要用PCR测序验证一种病毒，是否需要克隆呢？
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baidukk[使用道具]
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发表于 2016-4-4 22:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
看你的病毒大小
如果不大的话不需要
sars就是直接用75对引物扩增的
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yhtfyl[使用道具]
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发表于 2023-2-24 08:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
感谢楼主分享，受教了
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