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1、标本采集是我们实验一个重要的前期工作,但是大多数(我想是绝大多数)研究人员(像楼主这样的研究生居多)对标本采集以及保藏的步骤及相关注意事项知之甚少:
标本收集的准备工作 :术前办理相关手续,标本收集者首先对病人家属或病人行知情说明,并签署术中标本留取活检协议书,同时与临床科室、手术室密切联系,并由临床医生填写标本入库登记表,事先跟病理科医生协商,在组织标本足够大,能确保病理检查的前提下,切取少许组织进库保存,遇到小组织标本要果断放弃收集。
取材器材方面的准备 :供存放标本的液氮罐,经灭菌的取材器材,照相机,已编号的灭菌储藏管,资料登记本,橡胶手套等。
冰冻组织标本的收集 :在组织标本足够大,手术切下肿瘤组织后,主刀医生在无菌条件下将肿瘤组织用生理盐水冲洗两次后一分为二,3/4用于病理检查,1/4用于肿瘤库冻存。选取的标本包括肿瘤组织(避免取坏死组织并尽量冲洗尽血液)、 瘤旁组织和远端正常组织。标本的切取方法与时间控制:首先对大体标本进行观察和拍照,确认肿瘤的部位、范围,并与周围异己组织鉴别,进行相应的描述登记。在标本离体后应在最短时间内(<30 min) 更换器具切取包括肿瘤、瘤旁、正常组织组织标本,成直径约0.2 cm~0.5 cm的组织块,各取2块~4块,分别装入已编号的带有橡皮垫圈的灭菌冻存管中,旋紧盖子后放入液氮转移罐,防止冷冻后爆管。
标本的保存 : 将液氮转移罐中的标本储藏管按次序转移入超低温冰箱相应位置保存 。标本实行分类分组保存,每一病种的每一例标本的肿瘤、瘤旁以及正常组织配组放同一位置。
2、超低温保藏技术 :超低温保藏一般分为两种方式,一是超低温冰箱 保藏,保藏温度一般为-70℃~-80℃;另一种方式为液氮超低温 保藏,根据液氮罐的构造类型,可分为隔氮式和浸氮式,隔氮式是将保藏物保藏于气相中,保藏温度一般在-135℃左右,浸氮式是将保藏物保藏在液氮的液面之下,保藏温度为-196℃。