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【求助】关于荧光定量PCR的假阳性问题(探针法)
用荧光定量PCR检测一个基因,用的探针法。现在有两个问题:【求助】关于荧光定量PCR的假阳性问题(探针法)
1. 我的无模板对照总是出现曲线,在10-30循环,没有固定的位置。起初以为是污染,可更换了新的水、dNTP、探针等,基本都换了新的,还换了加样的地点,换了加样的枪,仍然出现,没有什么区别。不知道为什么?
2. 用或不用模板,总有些曲线是斜行抬高的,就是从一开始就斜着上去的。以为是探针降解,可探针也是刚买的,用TE缓冲液溶解后还是比较注意操作的。
求助各位,谢谢
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最新回复
any333 (2016-4-08 15:26:36)
我也是刚买的探针,买回来之后单独对探针跑线,都能跑出线,但不是S型的。。。是不是机器坏了?
bluelake (2016-4-08 15:26:55)
把所有的试剂混匀后再试一试,另,探针稀释一步要严格,稀释后分装,超低温保存,一定要避光
yjf1026 (2016-4-08 15:28:33)
多通风,或者用UNG酶吧
3.14 (2016-4-08 15:28:46)
wiwi (2016-4-08 15:28:59)
yhn (2016-4-08 15:29:53)
ero11 (2016-4-08 15:30:07)
bluelake (2016-4-08 15:30:23)
遇到同样的问题,不过我是用的SYBGREEN,用水做模板都有扩增曲线,CT值在5-30不等,所有东西都换完了,操作很小心,同样的有情况,并且有个孔只加引物和MIX,也有斜行抬高的斜线,简直不知道是什么原因,不知道怎么解决!
milkdog (2016-4-08 15:30:38)
8princess8 (2016-4-08 15:30:55)
8princess8 (2016-4-08 15:36:54)
831226 (2016-4-08 15:37:14)
【求助】关于荧光定量PCR的假阳性问题(探针法)