PCR仪 » 讨论区 » 经验共享 » 【讨论帖】cDNA文库构建 SOS

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴

标题:【讨论帖】cDNA文库构建 SOS

椰子叶子[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 70440
精华 0
积分 270
帖子 300
信誉分 100
可用分 2226
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-8-10
状态 离线
11
 
好的。谢谢。看来我还是不要急着过柱的好。因为我们三个人用一个试剂盒。你问道有别的柱子可替代的了吗?
顶部
wiwi[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 72948
精华 0
积分 466
帖子 612
信誉分 100
可用分 3861
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-16
状态 离线
12
 
我也是用总RNA,从组织中提的。xib99可以把你的dscDNA电泳图上传吗?我做的一直都不是很好,smear长度还可以,只是亮度不够。不知怎么回事。谢谢
smear长度还可以,只是亮度不够,如果这样的话
应该增加LDPCR的循环次数,可以增加2-3个循环
说明书上的TROUBSHOOTING上写的很清楚
应该根据你的RNA起始量来决定循环数
顶部
PCR[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74238
精华 0
积分 414
帖子 448
信誉分 100
可用分 3201
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-8
状态 离线
13
 

欢迎novelfunction加入讨论,我试过最大26循环,但是还是不太理想。请问你做到哪一步,过柱有什么技巧吗?谢谢!
顶部
椰子叶子[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 70440
精华 0
积分 270
帖子 300
信誉分 100
可用分 2226
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-8-10
状态 离线
14
 
我目前已经试到28个循环了,而且总RNA的量也加大了,但是结果还是很不理想。请教novelfunction,这样是否还要增加循环?还有就是和xib99一样的问题,谢谢。
顶部
wanglaoshi[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 77295
精华 0
积分 449
帖子 597
信誉分 100
可用分 3796
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-15
状态 离线
15
 

别着急!仔细阅读说明书,能做出来的。我比你幸运,分级分离第一次就做出来了。仔细检查下自己的操作,反应条件,所加试剂。看看哪里出错了,柱子你可以在clontench的代理经销的地方买到。但是我觉得一个试剂盒做两个文库足够了。下次你一定成功的。
顶部
INK[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 73382
精华 0
积分 348
帖子 375
信誉分 100
可用分 2696
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-22
状态 离线
16
 
请教一下,分级回收后连接载体,最后检测到的片段大小与你的分级回收到的大小一致吗?我碰到一个郁闷的问题,回收完后连接载体,最后检测到的都偏小,文库的质量不合格,正在郁闷之中,请各位大虾多多帮忙啊!谢谢谢谢
顶部
yhtfyl[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 415651
精华 0
积分 204
帖子 127
信誉分 0
可用分 605
专家分 0
阅读权限 255
注册 2023-2-21
状态 离线
17
 
感谢楼主分享,受教了
顶部