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标题:【求助】如何处理冻存组织和保存它的冻存管

北风那个吹[使用道具]
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【求助】如何处理冻存组织和保存它的冻存管

我是新手,要做RT-PCR,需冻存组织然后一起提RNA.现面临如何处理冻存组织和保存它的冻存管处理问题。看了园上关于这方面的一些讨论,仍有些疑问。请各位高手指点!!!
1。冻存组织迅速丢入液氮,时间是多少?几分钟?还是半小时以内?
2。取下的组织需不需要清洗?我们有些人是不洗的,但他们的组织量大,我的组织因为特殊,只能取约1~2克左右,我挺担心不够的
3。冻存管如不作DEPC处理,有什么要求?是否要求高压灭菌?还是新开包或不能过保质期?
4。提到锡纸包裹组织,以避免粘于管壁不好取,请问会不会影响结果?2ml的冻存管里加上锡纸,会不会太挤?
5.RNA 酶降解是越到后越关键,我的组织量少,冻存管如不作DEPC处理,影响可能性会否不同?
这些是我目前急需解决的,谢谢大家!
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1,需要尽可能快的把组织放到液氮中速冻,否则会导致Rna的部分降解,时间当然是越短越好。
2,我不知道你取下的是什么组织,但一般情况下是不用清洗的。
3,冻存管不用任何的处理就可以。
4,你可以把冻存管先装入液氮,然后把取下的组织投入冻存管的液氮中,在管中的液氮未挥发尽前投入装有液氮的保温瓶中,然后放于-70c就可以。这样就不会粘到管壁上了。
5,在我看来,不作DEPC处理应该不会影响最后的结果,因为你的组织在接触冻存管的过程中都是在极低温度下,即使有Rnase,在这种温度下其也不会有活性。在提取Rna的过程中注意防止降解就可以了。
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直接用镊子挟住去盖的冻存管然后伸进装有液氮的保温瓶中,待温度降低一定程度后,冻存管中即装满了液氮,然后在装入组织到冻存管中。
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北风那个吹[使用道具]
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谢谢。我也觉得在冻存管中加液氮挺好的,可惜操作难了点,你有好方法吗?
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直接用镊子挟住去盖的冻存管然后伸进装有液氮的保温瓶中,待温度降低一定程度后,冻存管中即装满了液氮,然后在装入组织到冻存管中。
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idea2011[使用道具]
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冻存管高压灭菌后再用最放心了,我试过,提出的RNA很好。另外,可以将组织放入冻存管后,盖子不要拧太紧,保证不会开就行了,然后装入保存盒或布袋投入液氮,液氮会进入冻存管内,组织一样不会粘壁;而且,从液氮中取出后,管内存留的液氮有利于低温和RNA抽提。
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有一点必须强调:一次性使用的冻存管,EP管,TIP头等,只要是正规厂家生产,包装完整,无需进行灭RNA酶处理,它的原材料和生产过程决定了它不可能被RNA酶污染。
保存标本不用那麽复杂,直接放进去,把冻存管的密封圈压好旋紧就行。
处理标本时尽量快一点。
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为保险起见,最好还是买那种RNase free的管子。
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milkdog[使用道具]
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越来越发现老帖子更有价值和讨论热情。不知道一个冻存管是只装一个100mg大小的组织块好呢,还是说一个冻存管里面装很大一整块,用的时候再切下一小块,两者相比如何权衡利弊呢?单独分装一小管以后提取RNA或者蛋白的时候方便,且组织避免了反复冻融和污染的损害,缺点是太耗冻存管以及保存容量增大好多,还有就是切得越多会不会越容易导致自身降解之类的可能呢? 如果一整大块一个冻存管保存,好处是取材时候方便快捷,缺点就是以后提取额RNA等操作时候麻烦以及可能的反复冻融。不知道具体操作如何选择,请多多指导!
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wanglaoshi[使用道具]
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QUOTE:
原帖由 milkdog 于 2016-4-9 10:50 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
越来越发现老帖子更有价值和讨论热情。不知道一个冻存管是只装一个100mg大小的组织块好呢,还是说一个冻存管里面装很大一整块,用的时候再切下一小块,两者相比如何权衡利弊呢?单独分装一小管以后提取RNA或者蛋白的时候方便 ...

你好,不知道你的问题后来是如何解决的?因为我现在液遇到同样的问题?望前辈不吝赐教,谢谢!
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