固相萃取

要做复方的体内代谢（主要成分为生物碱），要用到LC-MS，据说固相萃取柱在净化蛋白和富集效果方面都比较好，故在对血样处理时打算选择这种方法。
再次请教------
1. 正相柱除蛋白效果是否和C18相同，这类柱子除蛋白的原理是什么呢？
2. 由于复方及其代谢物成分比较复杂，我想这样处理血样：先过正相柱淋洗后用洗脱剂洗得极性较大组分、淋洗部分再用氯仿萃得低极性组分，两部分分别研究。(另一种选择是先过反相柱，淋洗部分0.45um过滤后直接进样HPLC，效果有何不同，哪种好些，给点建议！)
3. 过正相柱一般选择什么作淋洗和洗脱剂，哪种洗脱的比较全了。我知道反相柱是用不同浓度的甲醇洗，随甲醇浓度增大洗脱能力也增强。
4. 如果用液-液萃取，是直接往血浆里加有机溶剂么
感谢看到这里的每位战友，还望留下点意见之类的!

本文修改前的原问
请教几个关于血样处理用到的小柱
1.填料都是C18么，型号规格如何，适于几ml血样处理呢
2用法：是不是新柱水洗活化后，直接上血样就行了？
3淋洗剂一般是水？甲醇-水？甲醇？是不是应该做一下实验来确定，可否用乙酸乙酯或氯仿淋洗呀，不会溶解固定相吧
谢谢！

填料有很多种，就象色谱柱一样，C8，硅胶等；一般用水和甲醇进行活化，血样要离心一下；淋洗的条件要根据实验进行摸索，一般尽可能先去掉内源性物质，再收集含有药物的洗脱液。这方面的文献很多，自己查查。:P

1.填料都是C18么，型号规格如何，适于几ml血样处理呢
和色谱柱一样，有苯基，靖基和C18等，型号有按吸附值分得，如30mg，也有按上样量分得，如1mL
2用法：是不是新柱水洗活化后，直接上血样就行了？
一般先用甲醇活化，再用缓冲液平衡后就可上样了
血浆上样前应该用缓冲液稀释，保证分析物在柱子上有所保留
3淋洗剂一般是水？甲醇-水？甲醇？是不是应该做一下实验来确定，可否用乙酸乙酯或氯仿淋洗呀，不会溶解固定相吧
淋洗液和洗脱液是化合物依赖的，需要通过试验确定，你可以通过一批不同MEOH－H2o比（也可加酸或加碱）的洗脱，用不能洗脱下来的最大MEOH％作为淋洗液液，用能洗下来的最小MEOH％（当然要有最高灵敏度）作为洗脱液，这样能保证在不损失灵敏度的情况下可以尽可能少的洗下干扰物质
希望对你有帮助

大家可以向Waters咨询，有各种不同的固相萃取小柱。选择什么样的需要首先看分析什么样品。简单介绍如下：
中性样品：Oasis HLB
弱酸性样品：MAX
弱碱性样品：MCX
强酸性样品：WAX
强碱性样品：WCX

非常谢谢各位的回复！

太感谢您了，leastsun战友 ！您的话让我收获不小！奇怪斑竹怎么不给您加分啊

6楼

仍想请教一个问题
我要做代谢产物分析，有没有比较通用的柱子或常规点的淋洗及洗脱剂了
bow！
(关于查文献，小新能不能指点一二呀，拿什么做关键词了，如有比较得力的书，还望推荐,中英文都行。我实在是最近才知道有固相小柱这种处理方法）

一般来说
waters的HLB及MAX，MCX可以cover80％的化合物，
夏秋冬 战友说得几个品牌应该就可以成功了：）
共同进步，不用客气

关键词：药代动力学、高效液相色谱法，固相萃取等，很多的，你做什么药，可以pm我。:P

我认为跟你要做的物质有一定的关系，如以前我做皂苷 类化合物的时候采用的是D101大孔树脂，血样先用甲醇处理后（皂苷类溶于甲醇），超声几分后离心，这样可以除去一部分蛋白质，然后再上柱子进行处理。我认为上柱子的目的跟一般中药提取一样，就是除杂，富集，因而选择柱子和淋洗液需要按照药物性质来考虑，不过一般使用甲醇比较多，因为甲醇可以使蛋白变性。

1 柱的填料有好几种,首先根据样品选择适当填料类型,然后选择固定相萃取柱的大小和填料量
2 新柱一般先用1ml甲醇后用1ml水活化,血浆上样前用适当的碱溶液先碱化再装入萃取柱,此时,固相萃取小柱中的填料会吸附样品中所感兴趣的化合物或者样品中的杂质.这样,当样品流出时,所选择的化合物(包括杂质)被留在萃取柱上.
3 用一种强能洗脱杂质而有弱得能保留感兴趣的化合物的冲洗液来冲洗杂质。
4 用溶剂将被吸附在萃取柱上的化合物洗脱在溶液里。