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标题:[求助]门冬氨酸鸟氨酸的色谱方法

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[求助]门冬氨酸鸟氨酸的色谱方法

门冬氨酸鸟氨酸的色谱方法


门冬氨酸鸟氨酸遇到的问题:
1.使用氨基柱时基线很难平衡,色谱方法(磷酸二氢钾0.01mol/l:乙腈=50:50波长200nm)试着降低了一下盐的浓度(0.005mol/l)还是挺难平衡什么原因呀
2.冲柱子时我现在用的是先用25%的异丙醇然后再用用纯异丙醇冲洗结果柱压挺高的大约2000多psi是不是冲洗的方法不对呀
3.色谱方法是不是有问题还是选择的检测器有问题我现在用的是紫外检测器是不是灵敏度比较低呀!浓度挺大的(2mg/ml)结果峰面积挺小的
4.使用纯异丙醇冲洗完之后是不是容易堵柱子,必须得用甲醇把管道里的液体冲出来,我记得以前没遇到这种情况是不是试剂有问题呀?
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987789[使用道具]
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1、色谱柱难平衡可能与波长有关系,试试乙腈-水好不好平衡,查查是仪器的原因,还是流动相的原因。
2、异丙醇是液相常用溶剂中粘度最大的,压力高正常,必要时降低流速。
3、紫外检测器的灵敏度一般都差不多,可能是样品的紫外吸收太弱,做紫外扫描看看。
4、纯异丙醇不会堵柱子,就是柱压高,一般柱子都能耐受,没必要置换。  
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1、色谱柱难平衡可能与波长有关系,试试乙腈-水好不好平衡,查查是仪器的原因,还是流动相的原因。
2、异丙醇是液相常用溶剂中粘度最大的,压力高正常,必要时降低流速。
3、紫外检测器的灵敏度一般都差不多,可能是样品的紫外吸收太弱,做紫外扫描看看。
4、纯异丙醇不会堵柱子,就是柱压高,一般柱子都能耐受,没必要置换。  
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谢谢楼上的这位,不是堵柱子,是堵管道,刚才太着急了说错了尤其是进样阀与柱子那一段管道  
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没有道理,管道的内径比色谱柱孔径大了不知道多少倍。
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没有道理,管道的内径比色谱柱孔径大了不知道多少倍。
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mooon[使用道具]
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1、据我了解氨基柱就是不好平衡,你可以尝试低流速走一夜,第二天再进行试验

2、峰面积小是什么概念啊,你是做什么,含量还是有关物质啊,这个浓度是根据最小检测限定的

3、异丙醇冲柱子正确,压力高也是正确的,异丙醇粘度大所以压力高,可以尝试检测流速  
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氨基柱子,200nm 肯定不好平衡,,且柱子消耗快。
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mooon[使用道具]
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楼上说的太对了,这根氨基柱刚买的用了没两天柱压就不稳啦,我怀疑是不是检测器不太合适我以前做过氨基酸的都是衍生的方法现在用这种方法可能不太适合吧
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mimili_901[使用道具]
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我以前做过这个品种,将自己的感想做一下简单描述:
液相色谱仪:戴安U-3000型
(1)使用氨基柱,紫外低波长检测。
优点:样品不用衍生就可以用来做含量;也可以用来做有关物质,虽说峰高到不了1000以上,600左右还是可以到的。
缺点:(a)样品浓度过高,2mg/ml以上很正常,我们做过5mg/ml的,重复性较差,做有关物质还将就,做含量绝对不可以的。(b)系统不稳定且管路容易堵塞。(c)在做有关物质时,会出现一个富马酸的峰,且峰面积比较大,不同厂家的门冬氨酸造成富马酸的峰面积差异较大,影响有关物质的真实检测。

(2)使用C18柱紫外检测器检测,样品衍生后测定含量。
优点:测定过程比较稳定,重复性还算比较好。
缺点:(a)衍生剂对各种氨基酸的衍生程度不一样,不能真实反映原样品中各氨基酸的真实组成,结果不可靠。(b)只能用来做含量,不能做有关物质,因为样品衍生后系统会出很多杂峰。(c)样品量较小,衍生过程繁琐,重复性较差,同一个人一直做,效果还不错。

该方法由于存在缺点(a),在2010年药典征求意见稿时出现在第七批,但是未收载在2010年药典的主要原因。

(3)使用示差折光检测器测定。
优点:样品不用衍生。
缺点:检测器灵敏度太低,不能真实反映样品的组成,同时富马酸会有干扰。

(4)使用离子色谱仪测定(本人未使用过,听药典会老师讲的,效果很好)。
优点:样品不用衍生,灵敏度高,结果准确。
缺点:成本太高。

你可以根据实际情况,选择合适的方法进行检测,祝楼主好运!
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