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标题:【求助】抗体杂质检测项中的HCP残留酶联免疫检测...

vera+[使用道具]
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发表于 2016-4-11 22:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
商业化的HCP kit检测的结果只能代表通用的那些HCP的含量和比例，但是每个项目都有其特异的HCP比例，且各个蛋白对HCP的检测干扰程度不一样，所以见了专属的HCP检测方法是非常必要的。我们公司申报的一个产品，就被CDE要求补充特异的HCP检测方法。

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你们的这个品种是什么阶段，申报临床还是申报生产？
据我了解，申报临床很多还是采用的商业化试剂盒，审评意见会要求你今后采用专属的HCP，但是不清楚是不是当成发补意见的，必须补充后才批。
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yyaxw84[使用道具]
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发表于 2016-4-11 22:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你们的这个品种是什么阶段，申报临床还是申报生产？
据我了解，申报临床很多还是采用的商业化试剂盒，审评意见会要求你今后采用专属的HCP，但是不清楚是不是当成发补意见的，必须补充后才批。


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申报临床，是要补充后才批的，现在评审中心的老师越来越专业，越来越严格了
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nikonun[使用道具]
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发表于 2016-4-11 22:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 yyaxw84 于 2016-4-11 22:41 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
你们的这个品种是什么阶段，申报临床还是申报生产？
据我了解，申报临床很多还是采用的商业化试剂盒，审评意见会要求你今后采用专属的HCP，但是不清楚是不是当成发补意见的，必须补充后才批。
=============================== ...

看来现在很多工作都提前到申报临床阶段料，原来很多高要求都是申报生产才严格的。
那发补时间是有限制的，短时间能完成么，貌似免疫动物需要的时间比较长。
想了解现在一般都是如何制备特异性的HCP检测试剂盒的？
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yyaxw84[使用道具]
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发表于 2016-4-11 22:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 nikonun 于 2016-4-11 22:42 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

看来现在很多工作都提前到申报临床阶段料，原来很多高要求都是申报生产才严格的。
那发补时间是有限制的，短时间能完成么，貌似免疫动物需要的时间比较长。
想了解现在一般都是如何制备特异性的HCP检测试剂盒的？ ...

具体的我就不是很清楚了，主要这块不是我负责的。 不过流程应该大致相似吧，就是先捕获到无目的蛋白的全宿主蛋白，然后进行动物体内免疫，然后收获腹水进行纯化并进行滴度检测。
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发表于 2016-4-11 22:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

HCP的特异性抗体的制备总是一个值得探讨的问题，就是HCP是怎么来的很重要，HCP的特异性抗体是相对的。
HCP中各个蛋白丰度及免疫原性不同，HCP特异抗体就有差别。
所以想知道是否有人看过国外的文献或者国外监管是如何看待这一块的。
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yapuyapu[使用道具]
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发表于 2016-4-11 22:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

HCP抗体制备很少有免疫老鼠制备抗体的。cygnus试剂盒及abcam公司中的HCP抗体是羊多抗或兔多抗，这样的好处很明显，一次制备量可以够用几年甚至上十年，也避免不同制备批次间的差异。如后期工艺稳定，考虑工艺特异性，可另外再制备工艺特异性抗体，适合申报注册等。工艺特异抗原的制备，就是空白菌经过相同的发酵及纯化条件处理后所得，当然，纯化至哪一步，这个就得具体问题，具体分析了，不建议到最后一步，虽然针对性会更强，但不能保证不会缺失部分HCP，建议层析一步或两步，目的蛋白纯度达到一定要求就可以了。
HCP制备中免疫原性差异的问题是难以避免的，abcam公司针对大肠低分子量HCP的抗体，货号为ab181642，大家可以了解下。
对了，关于专属性验证问题，我们这里只考察了基质的影响。其实，houjinglhy 所说的也不错，可找其他相关蛋白验证，如你是CHO HCP试剂盒，是不是可以检测大肠或酵母的HCP，看是否存在交叉反应？
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shanzhapia696[使用道具]
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发表于 2016-4-11 22:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
突然纠结出一个问题，申报临床和申报生产阶段工艺不同，特异的HCP检测试剂盒应该也不同。
如果按照坛友说的，宿主蛋白制备需要空载体细胞经过全部或者前几部纯化步骤获得，那是否意味着工艺变更就要考虑宿主蛋白可能发生改变，anti-HCP试剂盒可能就要更新，例如国内通常的做法是申报临床阶段支持到临床I和II，之后临床III和生产研究要更改工艺，并且锁定工艺，此时无论工艺或者规模都发生改变，那特异性HCP试剂盒是否也应重新评估或者重新制备。
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 小中大
申报临床，是要补充后才批的，现在评审中心的老师越来越专业，越来越严格了

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现在申报临床如果用Cygnus 的试剂盒检测HCP残留已经不批了吗？
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wzqzy[使用道具]
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发表于 2016-4-11 22:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
专属性强的自然是自建ELISA方法，而不是商品化通用型ELISA试剂盒。

国外有些品种报产阶段，要利用自己的宿主（含空载体）免疫动物，获得的抗血清，分离纯化的多克隆抗体制备ELISA试剂盒。这些多克隆抗体自然是针对自己的宿主，但是这个方法也有局限性。1）开发周期半年以上，且成本过高。2）免疫动物获得多克隆抗体，只针对高免疫原性HCP。对于低免疫选型HCP，存在漏检的可能。
当然，除了ELISA外，也有2D-page，LC-MS等方法，但是这些还未在工业界广泛使用
不了解。国内报产阶段的HCP是否要求建立专属性方法。
......

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请教版主，F550 CHO HCP ELISA kit的标准曲线不是直线，应该怎么验证它的线性？还有就是线性范围是验证试剂盒说明书上写的1-100ng/mL，还是选择中间的某浓度（比如50ng/mL）的50%-150%（25-75ng/mL）来做？谢谢！
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wzqzy[使用道具]
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 小中大
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请问你们最后是自己开发HCP检测方法了吗？谢谢！
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