小中大这个问题略久了,首先感谢各位战友的积极回答。 对于这个课题,后续又做了一些研究。 本人经过脱K之后发现,碱性峰比例相应减少(仍存在),而酸性第一个峰的比例明显上升,表明此酸性峰中确由碱性峰的一个成分脱K而来,另外碱性峰中并非只是一个翻译后修饰导致,而是一个混合物。对于是什么导致的翻译后修饰,样品正在送检打质谱,待日后再讨论。
ylhuang0502 说得现象以及文献我之前也有阅读过,因为我这里是纯化,用的制剂纯品,并不涉及培养液中的铜。
为了得到足够纯的样品,将第一次纯化的再重复分离,样品纯度上升不少,,但依然存在上述的现象。 将碱性组分一直往后收集,收集完不浓缩,直接分析,仍能见到约有10%的主峰。这个现象也说明,酸碱性质相近,在这样的分离条件下,(HPLC,WCX-10柱子)不能完全分离。
综上,出现最开始的情况,两种因素都存在,分离效果不佳以及转化问题。
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又看到楼主的图谱了,仔细看了下,第1个碱性峰是单K,第2个碱性峰是双K,一般要求仿制药是第1个碱性峰的含量大于第2个碱性峰的,楼主的含量反过来了,我们现在也遇到这个问题了;另外,又遇到个大问题:放大到50L时,碱性成分增到了20%,以前做的小试研发工艺是除去酸性成分后碱性是符合要求的,现在碱性占的比例变大,就不好办了,酸性成分比碱性成分好处理,现在还得重新研究工艺除去碱性成分,希望上游放大到100L又出现了新的酸碱比例。