小中大电荷异构体的课题也做完啦，感谢各位战友给予的帮助。
最终分离的样品
对于最初提的问题，做个总结，欢迎补充讨论。
1、分离方法：最开始分离电荷异构体时，考虑过用置换色谱（displacement chromatography），也有相应的文献参考，找到了置换剂，但置换剂过贵，且仍需检测置换剂的残留，最终放弃这个方法，改用半制备的离子交换柱，与分析型的一致，也有利于直观观察收集。 不过此方法收集量小，做常规分析够用。 若准备做细胞活性分析及动物实验，建议直接去探索置换色谱吧。 分离后，样品的保存很关键，后续的检测方法条件也值得推敲。
2、关于图谱偏右： 偏右的原因还是因为上样量亦或是分离条件受限，尝试过降低上样量，峰型对称因子变好，但由于微小的组分分辨差，导致比例差异大。 尝试过加大洗脱液离子强度，也同样能形成不拖尾的峰，但同样也易使碱性峰被洗脱，影响分析结果。 综上，受限于离子性质过近，某些翻译后修饰量甚小，选择分离条件时要平衡这些因素。个人感觉，原则上能表征CQA，同时方法耐受性、重复性等等均符合。
3、酸碱性成因： 24楼 jackieustc 提到了类克的酸碱性峰主要的形成原因，但如氧化、异构化等并未提及。 我所做的抗体 结果显示，酸性峰主要由脱酰胺、唾液酸、蛋氨酸组氨酸氧化 、异构化等，碱性峰主要有赖氨酸、氧化、多聚、man5等导致，酸碱性峰中性糖差异也显著，如G0 G1F man5，这些中性糖是否会通过构象影响与柱子的结果，现在也不得而知，已有多篇报道，并未得到一致结果。
4、酸碱性峰的转化：关于转化，主要牵扯到的是哪种翻译后修饰占主导。如唾液酸使抗体带负电，而赖氨酸会使抗体增加一个正电荷，若抗体同时存在唾液酸及赖氨酸，情况又会是如何？ 两个赖氨酸存在下，会增大两个电荷，因而主要是碱性效应。 若在培养纯化等过程，赖氨酸被切除，碱性异构体就会转化成酸性异构体。7楼提到的CU离子，最终影响的也是赖氨酸的形成。 在课题中遇到酸碱性异构体中255位蛋氨酸氧化明显、经CPB处理后，碱性减少,酸性第一峰比例增加；经双氧水处理后，酸性第一峰同样增加显著。 这些现象似乎就能说明，对于此抗体255位蛋氨酸氧化导致构象改变，形成酸性异构体，但若末端赖氨酸存在，正电荷效应更加显著，最终主要显示碱性峰效应。受限于仪器条件，证明过程并为深入研究。
几点建议： 1、 关注聚体，聚体主要显示碱性，对离子分布、疏水分布及后续的活性实验都有很大影响。因为做碱性分析时，最好排除聚体干扰。
2、 疏水色谱在行业内并为得到较好的应用，但是其在表征PTM尤其是异构化，氧化等作用很显著。
3、 多读文献，由于PTM太过复杂，文献的积累很重要。当年提这个问题时啥都不懂，看了不下百篇文献后，很多问题都已经心中有底，只缺实验验证。
