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标题:【求助】关于抗体电荷异构体之间是否存在相互转化问题

hulu呼噜[使用道具]
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发表于 2016-4-13 12:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
聚体出峰在碱性位置，甚至还要靠后，活性成倍增加。
能排除当然最好。实际上很难，蛋白一般在离子交换层析过程中也会产生聚合

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嗯 对的，做了各种生物学活性、各类FcrR 及FcRn的活性研究，影响都很大，有些甚至出现了钩端效应。
在选择原料上，选择聚体最少的。 因为分离之后会富集，若碱性占10，1%的聚体经过富集后就能达到10%。
所以 最好做这个实验之前先经分离，可以用凝胶，可以用离子交换（分辨率高的介质，聚体可单独成峰）
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am10[使用道具]
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发表于 2016-4-13 12:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
赞一个一年时间做出了这么多心得。
关于第3条我想假如一个抗体同时存在1个K以及发生了脱酰胺/蛋氨酸氧化，那抗体是否会显示存在在主峰里？
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发表于 2016-4-13 12:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 am10 于 2016-4-13 12:55 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
赞一个一年时间做出了这么多心得。
关于第3条我想假如一个抗体同时存在1个K以及发生了脱酰胺/蛋氨酸氧化，那抗体是否会显示存在在主峰里？

首先 关于氧化对电荷的影响，主要是改变构象。因而转变成 酸性或者碱性都有可能。
若一个抗体存在一个K，同时发生了一个脱酰胺，似乎正负电荷抵消，出现在主峰处。但其实不然，我个人觉得应该是碱性的。赖氨酸在末端，正电荷的增强效应远大于在侧链的天冬氨酸。 为何这么说，可以看看类克cIEF图，存在一个K，pI在7.47，主峰7.34，K导致的偏移是0.13。 类克的第一第二个峰差异在于第一个峰同时发生了脱酰胺，产生的偏移0.7（peak1=7.16,peak=7.23）可见K产生的偏移效果远大于脱酰胺产生的偏移。 我不知道这么解释是否牵强。可以再看看其他抗体的电荷分布情况。 即使有量也很少，很难被分离出来。脱酰胺整体的大概占5%，既有K又发生脱酰胺的少之又少。
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hulu呼噜[使用道具]
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发表于 2016-4-13 12:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
太牛了，先挺后细细品味。
但是对你的课题来说，转化的原因呢，如何从碱性变成酸性的，氧化会形成酸性峰，但是末端的赖氨酸没那么容易掉的啊。如果赖氨酸不掉，单单氧化按你的描述，应该仍是碱性的。

===============================================================================================================

我课题探究的是电荷异构体的影响，，用的是成品。这之后的转化就如你说得脱K其实也不常见，主要还是氧化、脱酰胺等等。脱K，还是主要发生在细胞培养阶段。
我做的氧化实验，当初的设计是考察氧化的影响，并不是做转化研究。用的是不含酸碱性的主峰，双氧水氧化，看最终形成什么。 由于他本身不含K，所以最终形成了酸性峰。
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loli[使用道具]
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发表于 2016-4-13 12:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
恭喜lz把这些峰都分开了。
我们也做过，像1楼那样的图，可以认为是没分开，而不是直接转化的，转化的在stress的时候可能发生的比较多。
另外酸峰建议lz去过个boronate的柱子，一定会发现有glycation的。
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发表于 2016-4-13 12:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 loli 于 2016-4-13 12:56 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
恭喜lz把这些峰都分开了。
我们也做过，像1楼那样的图，可以认为是没分开，而不是直接转化的，转化的在stress的时候可能发生的比较多。
另外酸峰建议lz去过个boronate的柱子，一定会发现有glycation的。 ...

嗯对的，酸性峰中有部分唾液酸。我最终通过糖苷酶酶切后再进行IEC分析，以及2-AB标记后，鉴定糖型的方法，比例了酸碱性峰糖型的差异。 另外你指的GLYCATION（加糖作用）还是glycosylation（糖基化）
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发表于 2016-4-13 12:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 hulu呼噜 于 2016-4-13 12:57 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

嗯对的，酸性峰中有部分唾液酸。我最终通过糖苷酶酶切后再进行IEC分析，以及2-AB标记后，鉴定糖型的方法，比例了酸碱性峰糖型的差异。 另外你指的GLYCATION（加糖作用）还是glycosylation（糖基化） ...

glycation，不是glycosylation.
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loli[使用道具]
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发表于 2016-4-13 12:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
聚体出峰在碱性位置，甚至还要靠后，活性成倍增加。
能排除当然最好。实际上很难，蛋白一般在离子交换层析过程中也会产生聚合

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一般产生的是共价键还是非共价聚体，还有为什么活性成倍增加，有无文献参考学习下。
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loli[使用道具]
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 小中大
一般产生的是共价键还是非共价聚体，还有为什么活性成倍增加，有无文献参考学习下。

====================================================

不好意思，我这也没有文献。同事做的结果，我也只是听说。
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hulu呼噜[使用道具]
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 小中大
聚体出峰在碱性位置，甚至还要靠后，活性成倍增加。
能排除当然最好。实际上很难，蛋白一般在离子交换层析过程中也会产生聚合
一般产生的是共价键还是非共价聚体，还有为什么活性成倍增加，有无文献参考学习下。
......

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这里的多聚体主要是共价键，通过电泳疏水分子筛等手段鉴定猜测，主要是crd区二硫键错配导致。非共价的，在变性电泳中不错检测出来。有文献报道，我自己的实验结果也应征。文献改天找找再传。聚体会增加总亲合力，使活性增大。
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