生物质谱

如题, 实验设计中要使用一个23肽特异性阻断两蛋白质的结合（其中11个为TAT结构域）, 能想到的有几种办法：
1、 化学合成；
2、构建表达这一肽段的原核表达载体，大肠杆菌中表达，纯化；
3、构建可诱导的真核表达载体，转染靶细胞，观察表达和不表达时的差异。

原本打算用第一种方法，参考文献中用的，我觉得是公认的方法，很可靠，但是老板原先说没问题，今天咨询了一下 才发现太贵了，几个肽段可能要十万上下，让我改办法，但是第二、三种方法又不知道是否可行，真急人！

请教：
2能否行得通呢？我现在只知道序列，想象中还要载体构建，表达，纯化，是不是还要做肽段测序？我最后还要用biotin标记。整个过程难度大不大？顺利的话大概要多久能做好呢？
3更是没见过文献报道，纯粹是我的空想，好像一般都是合成好的肽段直接处理细胞的？正在查文献，不知道有没有人见过这方面的报道或者对此有什么见解?

2完全可以。用GST－tag，中间加thrombin的酶切位点。不用肽段测序，但是要HPLC纯化。

如果你做clone的速度快的话，7天把。

谢谢deadsea的回复。现在找到了美国biomatik公司，价格似乎可以接受，如果进口的手续不麻烦的话，就可以找他们了。

但还是要请教一下：按你的做法，GST可以切干净么？有什么公司接受这种合成业务（包括纯化和上biotin）么？自己做的话，没有色谱相关设备，也不知道怎么上biotin呀。还有这个方法的成本比起化学合成来怎么样？

多谢！

to mcskyward

如果实验室本来就有平台，克隆构建，蛋白质表达，HPLC反向分离，MS测分子量，交联biotin，进一步分离纯化鉴定。自己准备样品是 一件很容易的事。1个月左右基本能完成，而且质量有保证。

但是估计你的实验室没有这样的平台，建议还是购买为好，如果自己制备的话，不说时间长，而且质量也没法估计。

谢谢deadsea的解答。知道国内有做生物合成肽段的公司么？

再次感谢！

现在多肽合成沒那么贵啊。我们实验室有本生物公司的产品目录，我到他们网站上看了一下，很便宜的啊！
cuturl('http://www.jinsite.com.cn/peptide_synthesis_order.html')

多肽合成服务订购方法
服务流程：
1．如果客户对多肽服务有任何的需要或疑问，请通过电话（025-84347333）或email（peptide@jinsite.com.cn）与客服中心联系。
2．如果订制金思特多肽合成服务，请询价并注明详细要求，发送email至order@jinsite.com.cn 邮箱。
3．订单完成后，经过严格QC，即时交付客户以下结果：多肽冻干粉、 MS、HPLC报告.
4．如有任何质量问题，请通过电话或email（question@jinsite.com.cn）与公司客服中心联系。
服务价格：
1～30个氨基酸多肽价格(￥)
质量( mg ) 粗提物 去盐 >70% >75% >80% >85% >90% >95% >98%
1～4 35.00 47.00 63.00 79.00 93.00 106.00 116.00 124.00 187.00
5～9 43.00 56.00 74.00 93.00 108.00 124.00 136.00 147.00 220.00
10～14 51.00 64.00 87.00 109.00 128.00 147.00 160.00 172.00 259.00
15～19 53.00 67.00 92.00 117.00 139.00 163.00 177.00 192.00 289.00
20～24 57.00 71.00 104.00 138.00 160.00 182.00 192.00 219.00 329.00
25～29 61.00 74.00 112.00 151.00 173.00 194.00 203.00 238.00 356.00
30～39 64.00 78.00 121.00 163.00 183.00 203.00 22.00 253.00 380.00
40～49 72.00 86.00 126.00 167.00 190.00 215.00 234.00 269 405.00
50～59 76.00 89.00 139.00 190.00 213.00 235.00 253.00 288.00 431.00
60～79 89.00 103.00 163.00 223.00 224.00 264.00 288.00 326.00 490.00
80～100 92.00 106.00 185.00 264.00 290.00 316.00 345.00 384.00 576.00
1,000 333.00 346.00 570.00 793.00 871.00 948.00 1,037.00 1,151.00 1,727.00

31～40个氨基酸多肽价格(￥)
质量( mg ) 粗提物 去盐 >70% >75% >80% >85% >90% >95% >98%
5～9 52.00 67.00 89.00 112.00 130.00 149.00 163.00 176.00 265.00
10～14 61.00 77.00 104.00 131.00 154.00 176.00 193.00 206.00 311.00
15～19 64.00 80.00 110.00 140.00 167.00 196.00 212.00 230.00 347.00
20～24 68.00 85.00 125.00 166.00 193.00 218.00 230.00 263.00 395.00
25～29 73.00 89.00 134.00 181.00 208.00 233.00 244.00 286.00 428.00
30～39 77.00 94.00 145.00 196.00 220.00 244.00 266.00 304.00 456.00
40～49 86.00 103.00 151.00 200.00 229.00 259.00 281.00 323.00 486.00
50～59 91.00 107.00 167.00 229.00 256.00 283.00 304.00 345.00 518.00
60～79 107.00 124.00 196.00 268.00 293.00 317.00 345.00 392.00 588.00
80～100 110.00 127.00 223.00 317.00 348.00 380.00 414.00 461.00 691.00
1,000 399.00 416.00 684.00 952.00 1,045.00 1,138.00 1,244.00 1,382.00 2,072.00

41～50个氨基酸多肽价格(￥)
质量( mg ) 粗提物 去盐 >70% >75% >80% >85% >90% >95% >98%
15～19 75.00 94.00 129.00 164.00 195.00 228.00 248.00 269.00 405.00
20～24 80.00 99.00 146.00 193.00 225.00 255.00 269.00 307.00 461.00
25～29 85.00 104.00 157.00 211.00 242.00 272.00 284.00 333.00 499.00
30～39 90.00 110.00 169.00 228.00 256.00 284.00 310.00 354.00 532.00
40～49 101.00 120.00 176.00 234.00 267.00 302.00 328.00 377.00 567.00
50～59 106.00 125.00 195.00 267.00 298.00 330.00 354.00 403.00 604.00
60～79 125.00 145.00 228.00 312.00 342.00 370.00 403.00 457.00 686.00
80～100 129.00 148.00 260.00 370.00 407.00 443.00 483.00 538.00 807.00
1,000 466.00 485.00 798.00 1,111.00 1,219.00 1,327.00 1,451.00 1,612.00 2,418.00

这种多肽合成的公司太多了，我用过上海吉尔的，我用的那批不行，但是我听说有人用的很不错。还有好几家公司，例如楼上介绍的，还有园子里搜索一下看看。

感谢HaveNoMoney和deadsea战友的解答。

23肽的话，国内的公司无法保证肯定可以给你满意的多肽，不管是上海吉尔，杭州中肽，西安华辰（相对来说由于吉尔自产氨基酸，价格服务可能是国内最好的），我的经验是与你的肽的序列有关，如果那些侧链比较大的氨基酸（如Phe, Tyr, Trp, Arg)以及那些较难couple的Cys和Pro较多的话，或者连续有几个这样的氨基酸的话，我可以向你保证国内公司肯定做不了。因为国内公司不可能为你的肽优化合成的protocol,他们永远只用合成仪上default的protocol,而且他们的纯度也有问题,同理由于他们不会为你优化HPLC的梯度，所以纯度远比HPLC图谱上看到的即他们声称的低很多，所以不建议去公司合成超过二十个氨基酸以上的肽（同时也由于国内公司也没有好的多肽合成工程师）。国内有一些做多肽毒素的实验室，和有上海有机所有自己的合成仪，你可以与他们联系，价格会好很多，同时也专业的多。