液相色谱

　　各位坛友好：

　　我做的实验是苯和苯酐合成蒽醌，反应式如下

　　分析条件如下：

　　检测器：多波长紫外检测器

　　色谱柱：反相C18

　　流动相：甲醇：水=80：20，加柠檬酸调至PH=3

　　分析波长：257nm(根据文献报道，不知是否正确?)

　　1.刚开始根据文献上的报道我是用1，4-二氧六环来溶解蒽醌和苯酐混合物的(其中蒽醌和苯酐都是纯的物质)，但是发现不知为什么如果单是进溶剂1，4-二氧六环它本身也会出峰(见色谱图1)，从而导致出峰很乱，为什么溶剂1，4-二氧六环会出峰呢?

　　2.后来我试着用甲醇来溶解纯的蒽醌(蒽醌称的是0.0025g用甲醇溶于25ml容量瓶中，浓度是0.1mg/ml)，发现峰型很好(见色谱图2);

　　3.然后我就用甲醇来溶解蒽醌和苯酐的混合物，混合物中苯酐和蒽醌的质量是称的都是0.0012g,然后用甲醇溶于25ml的容量瓶中，发现出的峰(见色谱图3)，可以看到蒽醌的响应因子在140-150mA，苯酐的响应因子只有10-20mA，我想问的是苯酐和蒽醌的质量之比是1：1，而它们的峰面积之比是不是也应该是1：1?另外保留时间在2.439min的峰是不是就是苯酐呢?

　　4.色谱图4代表的是单进苯酐的峰，苯酐是在这个时间出峰吗?

　　5.另外流动相中水不加柠檬酸时，出来的峰型也差不多，我想问的是这里的柠檬酸主要有什么用?

　　希望大家畅所欲言给与帮助，在此先谢过了，谢谢大家!!!

1.关键是你的1，4-二氧六环是色谱级的吗？肯定不是
3.响应大小跟物质本身的摩尔吸光系数有关，而这个系数又跟物质的结构有关，所以，不同物质的峰面积跟质量是不成比例的，只有同种物质才可以在一定范围内用峰面积跟质量成正比这个关系定量。
4.可以这么认为。因为就多出了这么一个峰！
5.我认为柠檬酸一个可以抑制柱的硅醇基解离使色谱峰不拖尾，另一个可以螯合反应液中的高价金属离子（如果有）起到保护柱的作用。

1、应该再进一针甲醇，看看溶剂峰的位置。
2、峰面积与样品在该波长的相应值有关，因此，不一定是1：1.
3、二氧六环在该波长有吸收，也是可能的。
4、二氧六环做溶剂与流动相的匹配不如甲醇。
5、要考虑苯酐的稳定性。

甲醇我也进了一针的，结果是没有出峰，如果我想用内标法来测蒽醌的含量，内标物可以选什么物质呢？另外，如果用面积归一化法或外标法，需要注意什么？哪个准确更高点啊？

内标只是消除进样误差，现在气相色谱有的用，液相已经很少用了，对于自动进样的仪器就更没有必要了。有条件的话用外标法，但是要有对照品。

1.1，4-二氧六环出峰也是可能的。说明1，4-二氧六环或者其含有的杂质在该波长下是有吸收的。而且出的杂峰比较多。应该不适宜作为本方法的溶剂。
2.因为本身流动相中含有甲醇，而且甲醇在250nm以后的吸收很小。如果待测物质在甲醇中稳定的话，建议用甲醇来溶解，或者流动相能溶解的话用流动相来溶解。这样可以有效消除溶剂峰。
3.应该是蒽醌和苯酐在波长下的吸收系数不一样，也就是它们在该紫外波长257的响应值是不一样。具体可以取两种物质进行紫外扫描来判定。这个也是检测复合样品中普遍存在的现象。
4.在此条件下再进一针溶剂，如果不是溶剂峰的话。那就可以判定2.4min左右的峰是苯酐的色谱峰。
5.柠檬酸的作用，这个没做过这种化合物的不太好说，不过一般流动相调节PH的话，基本都是为了调节峰型或者相邻杂质的分离度，还有就是为了保持样品和色谱体系的稳定性。
希望以上回答能对你有一定得帮助。

2个物质不一样响应是因为最大吸收波长不一样。
2.4的那个是苯酐。

二氧六环的截止波长是220,按道理说不会有吸收，可能你的溶剂不干净。

1. 1，4-二氧六环在257nm估计吸收是很大的，可以直接扫描看看吸收波长扫描图。从图谱1上看有那么多峰，可能1，4-二氧六环会和流动相反应，也有可能柱子本身就脏了。从谱图看，1，4-二氧六环就不适合作他们两的溶剂。
2。进样量之比为1:1，峰面积不一定就是1:1.因为在257nm两个目标物的吸收不一样，所以响应就会不一样。
3.图上那个是苯酐。
4.加柠檬酸的话，我觉得是为了调整流动相的极性，从而调整目标物在流动相与固定相之间的分配比，得到好的分离度吧。

1.兄弟的1，4-二氧六环纯度不行，和1，4-二氧六环的紫外吸收无关，流动相能容最好用流动相。
2.峰型好说明条件还行，可以在此基础上优化。
3.不同物质在不同波长有不同的摩尔吸光系数，参见紫外可见吸收。
4.确定保留时间，你进含有单一物质的样，用保留时间来确定
5.不知道兄弟这个柠檬酸有什么用，都没有个固定的浓度。我猜是当缓冲用