生物质谱

最近在做原核，表达出了一个蛋白，大小与目的蛋白预测大小相符，本身连接上了HIS标签，经过镍柱纯化，成功挂柱洗脱。于是准备进行蛋白质谱鉴定，想进一步确定的确为目的蛋白。质谱样品为经过SDS-PAGE电泳之后切下来的片段，从制胶到最后切胶的过程中一直佩戴了手套，但是最终的鉴定结果竟然是角蛋白，这让我想当迷惑，找不出原因，希望路过的大大们可以提点一下，多谢各位啦

楼主你好 我也有同样的问题 跟你一模一样 请问知道是啥原因了吗 怎么解决的呢

做质谱角蛋白污染很难控制，带手套只能防止手上的角蛋白污染，但如果手套换的不勤快，在反复摘手套的过程中有相当大的可能性把手套外表污染，进而污染样品。
另外还有头屑的角蛋白也容易污染样品
不过表达纯化的样品就算有角蛋白污染也不至于检测不到目的蛋白
如果你的结果只有角蛋白的话，建议看看是不是表达质粒有问题，如果移码了，就很可能检测不到

第一看要看一下你跑的胶，目的蛋白的量怎么样，如果本身条带很浅很细，那很容易受到污染蛋白的影响，质谱鉴定过程中是很难保证完全没有非样品信号，有的非样品峰如角蛋白的峰、酶自切峰还可以作为内标校准峰，所以并不是什么坏事情。质谱鉴定时的信号本身就是一个此消彼长的过程，如果你的目的蛋白的含量高就会把污染蛋白肽段的信号压制下去，获得更多的样品信号峰，从而获得更可信的鉴定结果。所以如果发现目标蛋白量小，就加大上样量。
第二酶解过程中的影响，如果你的酶解过程有问题，你再多的样品量也没有用。如果酶没有进入胶内，没有切到样品蛋白，那自然就只能切到胶外的污染角蛋白。所以要仔细检查酶解过程有没有闪失，这个是关键。
希望对你有帮助，good luck

在整个实验过程中不仅要带无粉乳胶手套，还要戴口罩，最好戴帽子，另外，检测你的试剂有没有污染，切胶的一套工具用超纯水洗干净。