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标题:【求助】做完之后用BCA法测定了蛋白质的浓度

美人鱼[使用道具]
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发表于 2016-4-28 11:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】做完之后用BCA法测定了蛋白质的浓度

最近在做western blot 的实验，做完之后用BCA法测定了蛋白质的浓度，但是怎么能够知道目的蛋白的质量啊？用什么方法进行测定？谢谢各位大侠了！！
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yayayu[使用道具]
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发表于 2016-4-28 11:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

什么叫做：“做完之后用BCA法测定了蛋白质的浓度”？不是先进行蛋白定量再做western blot吗？我们是这么做的，保证每个lane上样的蛋白量一致。至于怎么定量，用BSA作为标准品，先做个标准曲线呀。你买的BCA试剂盒里面应该有标准曲线的做法吧
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daomei[使用道具]
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发表于 2016-4-28 11:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

正常情况下是应该先做BCA ，再做WB，但是这次有点小状况就先做了WB，加样的体积是一样的，但是现在就是不知道量是多少，用法BCA法只能知道总蛋白质的量，我现在想知道的是怎么求某一蛋白质的量，例如我的目的蛋白的量。谢谢！！
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n111[使用道具]
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发表于 2016-4-28 11:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

用BSA不同浓度梯度做一个标准曲线，在用你的目的蛋白所测的值看在曲线中对应的浓度。BCA试剂盒里有具体的说明呢。
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huali[使用道具]
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发表于 2016-4-28 11:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

你的蛋白在总蛋白中的含量？通过凝胶成像软件的光密度分析去算一下吧
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zouyou[使用道具]
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发表于 2016-4-28 11:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

那就再用同一张膜做个内参，都进行灰度扫描后，用目的条带的灰度值除上内参的灰度值的比值，进行各组比较，WB不就是相对定量吗。以后再补个好结果。
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