【求助】关于蛋白质的鉴定定量什么之类的问题

字体: 小中大 | 打印发表于: 2016-4-28 11:29 作者: QQ爱来源: 分析测试百科网

哎...我都没脸来问各位大神那么白痴的问题...
:cry:可是我写不出来作业我还是要来问...
protein quantification,,,,,protein detection,,,还有 protein identification 有什么区别??
quantification是定量,,那就是用BCA或者Bradford Assay就可以quantification了吗??
那 detection 和 identification呢??
我一直没懂那个SDS-PAGE ,, ELIAS ,,Mass Spectrometry 和 Westren blotting是用来做什么的??
貌似SDS-PAGE和,Mass Spectrometry都是用来测分子量??
:rol:测分子量有什么用??? .....知道分子量就能知道这个是什么蛋白质了??
还有,,我的载体里有6x his tag.....这个重组蛋白质就.....该用哪种方法来detection和quantification比较好??
还有....:rol:测纯度要用什么测...
:shuai: 请原谅一个很努力的在自学中的智商不好的孩子....

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【求助】关于蛋白质的鉴定定量什么之类的问题

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美人鱼 (2016-4-28 11:29:37)

话说.....我的载体带了那个his的标签,,
然后重组蛋白纯化用IMAC,,
多肽的纯度和数量的确定用SDS-PAGE,,
蛋白质的鉴定用 western blot ....
:rol: 这个连线题我做对了么??
n111 (2016-4-28 11:29:59)

首先，楼主最好找本比较基础的蛋白质相关教科书看看，这样你能有比较清楚地认识
BCA或者Bradford Assay是蛋白质定量法，这个定量是测定样品中有多少蛋白，譬如每毫升样品多少毫克之类，蛋白是具有活性的物质，在你研究他的功能之前，至少得先知道样品中有多少。
SDS-PAGE是将蛋白在聚丙烯酰胺凝胶中电泳，由于不同分子量大小的蛋白泳动速度不一，因此对照marker（就是一系列不同分子量蛋白）可以较粗略的估计分子量。如果要精确点的结果，就需要上质谱。
western blot即蛋白质印迹，是利用抗原抗体特异性反应鉴别蛋白的，譬如一份样品中有很多蛋白，但你想知道有没有某蛋白A，那么就找针对A某段序列的抗体，通过特异性反应，抗体与样品中蛋白A结合，在通过一定的二抗，就可以进行检测。
另外，你的连线正确
hcy517 (2016-4-28 11:30:24)

我也再写作业。哈哈。楼主好可爱。。。
用Histag的柱子纯化得到蛋白，因为你的蛋白有histag标记，所以只有有histag的蛋白才会吸附在柱子上。通过洗脱可以得到目的蛋白。
然后用BCA或者Bradford Assay，测量quantify 得到蛋白的浓度，大概有多少蛋白
再用 Western-Blot 通过特异结合目标蛋白的抗体，identify是不是真的是目标蛋白。
xiaoxiaoai (2016-4-28 11:30:48)

其实我也很想找本书来认真的看,,
:cry: 可是我1个月后交作业,,同时还要考期末....
然后下学期就不用学分子生物学了
所以.....好吧!!我还是会很努力地学的哈哈....
mimima (2016-4-28 11:31:14)

ok:谢谢....我最喜欢别人说我可爱了!!!
你说的话我瞬间就看懂了....
果然生物对我是很痛苦的东西啊
malong (2016-4-28 11:31:37)

BCA是定量,,,SDS-PAGE是测分子量.....
那个.....
数量....和....分子量....是什么关系....
我觉得我这个问题真心欠揍...:shuai:可是我真不知道...
今生如此 (2016-4-28 11:32:03)

这个问题确实太基础了。。。我都不知道该怎么解释
BCA等方法定量结果举例来说是毫克每毫升，是蛋白总质量，另外一个是蛋白分子量，可以理解为每个蛋白分子的质量。
jishiben (2016-4-28 11:32:33)

D谢谢...虽然我还是不怎么懂,,我只我要从高中开始念了....
但是起码我知道不是一个东西了
.....我现在就抱着,,做完整份8页纸的报告交上去,,报告能拿到55分就好了...
我现在都不敢奢望能拿二等一的学位了
PP熊 (2016-4-28 11:32:59)

cry:同学生不能用BCA和SDS-PAGE,,
因为BCA和SDS-PAGE是determine all the protein,,
而我们只要那个specific的protein.....
:sweat:还有这样分的么...
然后同学们说用什么crystallization,,质谱,,之类的...
我就瞬间凌乱了....
yayayu (2016-4-28 11:33:27)

这样分没错啊，楼主没有理解前面给你写的东西么？麻烦你还是抽空看看书吧。
BCA只能检测在样品中总共有多少蛋白，给出的结果是蛋白含量，mg/ml之类，SDS-PAGE可以讲蛋白按分子量大小分开，这样可以供推断是否有你需要分子量的蛋白在其中。如果只要那个特殊带HIS-tag的蛋白，鉴定可以用western，纯化可以过柱子（前两天我自己的一个蛋白用Ni-NTA Resin纯化）。
你同学讲的是针对什么的？质谱的话可以搞清精确分子量，同时提供一系列信息供鉴定。结晶化的话，需要纯化蛋白，通过结晶可以获得蛋白结构，