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标题:【求助】蛋白实验，想获知鸡卵清蛋白，酪蛋白分子量

冰激凌[使用道具]
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发表于 2016-4-30 11:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】蛋白实验，想获知鸡卵清蛋白，酪蛋白分子量

现在做蛋白实验，想获知鸡卵清蛋白，酪蛋白，牛血纤维蛋白原的的分子量，等电点，尤其是这几种蛋白的尺寸（？nm*？nm*？nm）。
谢谢各位大侠啊，谢谢。
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发表于 2016-4-30 11:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

分子量等电点通过质谱就行了，打二级质谱，搜索到了阳性结果里面全都有，尺寸大小很难做，和做结构的方法相似吧，核磁共振、晶体衍射。。。这个我只听说过，没做过。
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发表于 2016-4-30 11:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

我表达的重组蛋白，大小大概10kD左右，标签大概6.6kD，所以加起来应该是十几kD的样子。结果我跑SDS-PAGE明显表达的大小约为25kD不到一点，请各位帮我分析一下是怎么回事？
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发表于 2016-4-30 11:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

SDS-PAGE显示的分子量通常称为表观分子量（apparent MW),表观分子量与基于氨基酸组成推算的理论分子量通常会有差别，主要是由于蛋白表达时的翻译后修饰有关，有时与氨基酸组成也影响表观分子量。进一步的验证表达的蛋白是否为你的目的蛋白，可以纯化后进行蛋白的C端及N端测序分析，或者进行western验证等
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发表于 2016-4-30 11:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

补充一下：一般跑蛋白电泳出现大小有不同，不就是和分子内和分子间二硫键以及蛋白质聚集、降解有关系吗？但是这个20多kD的结果感觉那种情况都套不上去啊，谁能帮我具体的分析一下可能是怎么回事呢？实在不行我就去打个质谱看看具体多少分子量了。
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发表于 2016-4-30 11:20 资料  个人空间 短消息  加为好友 QQ

 小中大

【回复】

正在做western，但是可能是分子量比较小，一直转膜不成功
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发表于 2016-4-30 11:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

如果构建没有问题的话，感觉和蛋白质的修饰有关系。。还有就是我感觉ladder在不同浓度的胶上面指示的大小感觉还是有区别。。
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发表于 2016-4-30 11:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

目的蛋白的亲水性如何？蛋白marker的大小也不是完全准确的，尤其是目的蛋白疏水性强的话，变性不如marker好，和marker在特定的胶里跑得不一样的可能性很大。这就是所谓的表观分子量和理论分子量有时候区别比较大。
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发表于 2016-4-30 11:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

很有可能是这个原因，目的蛋白本身疏水性是比较强的，但是这个大小会差多少呢？目的蛋白才10kD，加上标签也才17kD不到，结果就差不多差出去１０kD去了。。。:rol:
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zouyou[使用道具]
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发表于 2016-4-30 11:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【回复】

这个蛋白肯定是二级结构还没有完全打开的，我就是纠结怎么会差这么多。。。ladder的差别倒是计算在内了
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