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标题:[求助]液相色谱柱柱压升高问题请教！

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发表于 2011-11-11 17:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]液相色谱柱柱压升高问题请教！

[求助]液相色谱柱柱压升高问题请教！


本人是液相新手，最近用了一个phenomenex Hydro-RP的色谱柱， 规格是150*4.6*4.
因为项目很着急，所以仓促之间定的色谱条件有点苛刻，最后用的是25%的乙腈，2.0ml/min 的流速，液相色谱仪是Waters。刚开始用的时候。压力是2400左右， 每次使用的流动相都用0.22微米的膜过滤，因为是原料药，所以样品没有过滤。用完都用50%的乙腈冲洗半小时。再用100%的乙腈冲洗1小时，但是用了几天后发现压力逐步上升。使用过程中压力很稳定，但下次再使用时就发现压力上升个100~200的样子（每次用都这样上升，现在已经是3400了，仪器的压力上限是4000，所以现在又点寝食难安的感觉！！！）。感觉是色谱柱被杂质堵塞了，所以用10%~100%的乙腈梯度洗脱4小时，压力始终没有下降。后来用异丙醇0.2的流速冲洗2小时后，换100%的乙腈0.5流速冲洗4小时，压力依然没有下降。不知道是不是色谱柱在较大的压力下塌陷了， 但是前后做出来的色谱图比较，理论板数和分离度以及出峰时间都没有什么大的改变！ 本人新手，望指点！
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木槿[使用道具]
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发表于 2011-11-11 17:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
75%的是什么呢？缓冲盐的话是多大浓度的呢？
适当反冲一下看是否压力有所降低？如有降低，可继续反向处理，或者打开柱头超声清洗之，上述操作都可能对柱子带来伤害，实属无奈之举。
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8964357[使用道具]
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发表于 2011-11-11 17:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
感谢楼上的回复，流动相就是乙腈：水=25:75，没有盐！
我之前使用完毕后， 柱子保存在纯乙腈中，因为今天要用，所以昨天晚上用异丙醇0.2的流速正向冲洗了1.5小时， 后用100%乙腈0.5流速冲洗了4小时， 可是今天使用的时候， 发现压力升到了3400，（上次使用的时候是3100左右），不知道使用异丙醇的时候要用什么样的梯度，是不是我的操作有疏忽？但是看很多资料都是这么说的， 使用完异丙醇后，用纯乙腈冲洗就可以了， 而且今天使用的时候， 发现我的图谱基线很不稳， 进样之前很好， 开始走样品后就不行了， 噪音很大，不知道是什么原因，已经检查了灯能量在合格范围内。我今天的样品还是用0.45的膜过滤了的！！
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发表于 2011-11-11 17:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
会不会你水相中有盐，使用有机溶剂冲柱子，反而会使盐在柱子的析出结晶，而阻塞柱子，如果你的水相中含有盐的话，建议用90%的水冲下柱子，时间不用长，15分钟就够了
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发表于 2011-11-11 17:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

感谢您的回复！没有盐，流动相就是 乙腈（进口）：超纯水=25:75，过0.22有机膜，我今晚用75%的乙腈，0.3的低流速冲洗一晚上， 明天看下效果！
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发表于 2011-11-11 17:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
曾经听某公司的专业人员说，在色谱柱保存溶剂的选择上说乙腈保存对柱子不好，好像是说乙腈可能会在其中产生高聚体，是不是因为这个原因造成堵塞呢？如果是，那建议你不要用乙腈封存。用甲醇封存。
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 小中大
亦或者是不是你的原料药不干净？长期积累导致柱堵塞了？
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发表于 2011-11-11 17:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
之前原料药确实是没有过膜，就是用纯乙腈溶，然后超纯水稀释至刻度，就直接进样了。如果是柱子被样品堵塞了， 有什么好的解决方法吗？我昨晚用75%的乙腈小流速反冲了一晚上， 柱压没有丝毫的改变！之前10%~100%乙腈梯度洗脱也用过了，也没有效果！
所有应该注意的地方都注意了， 但是我们这里原料药大家都是不过膜直接用，从来没有出现这种情况，所以我一直没有对样品过滤，我现在也担心是样品里面有杂质，或者溶解性不是特别好， 有少量析出，梯度洗脱、异丙醇小流速冲洗、小流速反冲等常规方法都用过了，都没有起色， 我正在考虑是不是要把柱头卸下来超声，不知道有没有哪位大侠有更好的方法！先在此谢过了！
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发表于 2011-11-11 17:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不接色谱柱的时候，系统压力是多少？是不是系统压力增大了，原因是某个环节需要清洗处理什么的
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bananapeople[使用道具]
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发表于 2011-11-11 17:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
已经证实不是系统的原因，确实是柱子出了状况。
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