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标题:[求助]凝胶色谱柱的使用寿命

kswl870[使用道具]
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发表于 2011-11-15 12:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]凝胶色谱柱的使用寿命

[求助]凝胶色谱柱的使用寿命


我使用的TSK3000SW型7.5*600的色谱柱，我们做了很多年，发现每根色谱柱只能使用到80-100批次(最多一次有用过200批，仅一次而已)的样品就发现柱子不行了。我想请各位大侠帮忙找一下原因！！谢谢！！！
我们的处理方法：
新柱子的使用和处理：先使用超纯水以0.2ml/min流速冲洗过夜，后以0.5mol/l磷酸二氢钠以0.4ml/min流速洗至基线平稳（一般是5个柱体积），然后再以1%异丙醇以0.2ml/min流速过夜。
流动相：磷酸二氢钠5.0321g，磷酸氢二钠24.2736g，加水500ml使之溶解，加异丙醇5ml，混匀，PH值为7.0。过0.45膜,超声30分钟备用。
色谱柱工作一天后用1%异丙醇以0.2ml/min流速冲洗过夜。
长时间不用柱子（如周末、放长假）用先使用超纯水以0.2ml/min流速冲洗过夜，后以0.5mol/l磷酸二氢钠以0.4ml/min流速洗至基线平稳（一般是5个柱体积），然后再以1水以0.2ml/min流速过夜。再0.05%叠氮钠溶液以0.2ml/min流洗（15h以上）。之后取下色谱柱，于30度以下常温保存。
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发表于 2011-11-15 12:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你好，我也一只用凝胶色谱柱，大概用了将近一年了。
色谱柱型号：TSK-GEL G5000PWXL。我们一直用了保护柱(TSK-GEL)。
流动相：磷酸二氢钾，磷酸氢二钾，加水溶解，pH值7.8。
我们用下来，发现，保护柱的柱压升高很快，不知道你们是否用保护柱，如果不用的话，那柱子的寿命肯定短。
再问一下，你所说的柱子 不能用了，是峰型变差了，柱效变低了，还是柱压变高而不能用了。
用这种柱子的好像比较少，总算找到知音了，能否讨论讨论呢。
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kewanqi2011[使用道具]
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发表于 2011-11-15 12:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我有用在线过滤器的，那边的工程师说没问题的。
我也问了他们本部的工程师
他们也解决不了
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kewanqi2011[使用道具]
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发表于 2011-11-15 12:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也想找个用这种柱子的，今天终于看到你了。呵呵........
柱压原先使用的时候也是升高的挺快，到后来改进方法（离子效应的作用）用0.5mol/l磷酸二氢钠以0.4ml/min流速洗至基线平稳就好了很多。
我们判断柱子不行了是因为我们做血液制品的分子大小分布，单体加二聚体的含量要在98%以上，要高于国家标准。当我们发现柱效低于600的时候就判断柱子不行了。
你们一般一根柱子可以做多少批次啊？
用的勤快吗？一次大概做多少批？一个月用几次？
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发表于 2011-11-15 12:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

不好意思，最近忙辞职的事情，一直没有来看看。
关于这个色谱柱，我们找工程师，都找了好几回了，也一直没有解决问题。
我们问题主要是表现在柱压的升高。因为凝胶柱承受的压力小。我们使用的凝胶柱最大不能超过2Mpa。现在发现压力都升高在预柱上了，所以现在我们采取的对策是把压力上限调高。因为柱子上的压力一直小于2Mpa，所以现在是牺牲预柱了。
我们做得也还频繁。一次大概十几批。每个星期有一次。曾经一次性做了将近200批。现在还没有换过柱子。听说柱子要买好点的。我们这根是将近1W，上次听一个兄弟说他们买的是1.5W的。
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发表于 2011-11-15 12:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
关于这个色谱柱，我们找工程师，都找了好几回了，也一直没有解决问题。
我们问题主要是表现在柱压的升高。因为凝胶柱承受的压力小。我们使用的凝胶柱最大不能超过2Mpa。现在发现压力都升高在预柱上了，所以现在我们采取的对策是把压力上限调高。因为柱子上的压力一直小于2Mpa，所以现在是牺牲预柱了。
我们做得也还频繁。一次大概十几批。每个星期有一次。曾经一次性做了将近200批。现在还没有换过柱子。听说柱子要买好点的。我们这根是将近1W，上次听一个兄弟说他们买的是1.5W的。
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发表于 2011-11-15 12:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
凝胶色谱柱的保存也很重要，我们都是用含0.05％叠氮钠的洗脱液的，这样有助于防止细菌繁殖。
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发表于 2011-11-15 12:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
终于找到知己了，呵呵，我们也遇到了同样的问题，现在也没有解决的办法，我们用了才3个多月吧，1万买的，现在就不行了，主要是柱效下降，检测不出来，峰行变宽，三个峰现在成了两个峰，还不敢给领导汇报呢，
流动相：磷酸二氢钾，磷酸氢二钾，加水溶解，异丙醇50ml，PH7.0。
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dog002[使用道具]
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发表于 2011-11-15 12:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也用过这种柱子，大概用一年左右柱效就变低。不过好像用流动相冲柱子久点，然后再拆了柱子用异丙醇洗系统，再用就会好一点。异丙醇我们是不用来直接冲柱子的。
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woshituzhu[使用道具]
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发表于 2011-11-15 12:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我一直使用预柱的，觉得预柱的功能还是发挥得很大。因为我们柱效没有下降过，主要是柱压的升高，而柱压的升高主要表现在预柱压力的升高。所以我们做一阵子，发现预柱压力有明显升高后，就用0.2mol/L的NaOH溶液反向冲洗预柱(流速0.3mol/L)，效果很显著，可以明显看到柱压的下降（从1.8MPa下降到0.6MPa），然后再用水正向冲洗预柱。这个方法屡试不爽。但是做了一年之后，发现，预柱的压力升高频率变快，每做一次，大概十几批样品，预柱压力就升高了不少。而且用以前的方法处理（碱反冲），虽然能降低一些压力，但是已经不能降到以前的水平。我们怀疑是有一些不溶于碱的杂质进了预柱，而冲洗不下来，导致的柱压升高。所以现在我们采取的方法是，做完一次，仍然用碱反冲预柱，能降多少算多少。然后把压力上限提高。这样仍能继续做样。我们的柱子一直保护得很好，柱压没有升高，柱效也没有下降。所以建议大家还是要用预柱。预柱我们用的同柱子一样的品牌，大约3千一根。这样也能只牺牲预柱，节约不少钱。更何况现在我们作样还是很顺利。用了一年多了。
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