生物制药

1. 我觉得先调再定合适些，若配制1L的缓冲液，一般标准会要求加入900或是950mL水去溶解，再用酸或碱去调整pH值，最终用水定容，。你后加入的这部分水不会影响你的最终pH值，否则就不用称之为缓冲液了，这样做就保证了你的最终浓度是0.2mol/L硫酸盐缓冲液。先加入1000mL水再去定容的话，最终的浓度难以确定，因为标准无法说明到底加了多少乙醇胺才将pH值调至2.3。其实两种方式对于HPLC测定结果影响不大，但先定再调的话不利于标准的制定。

2,3基本同意biabiade战友。

流动相中，真正影响主峰出峰时间的是溶液的pH值。缓冲液的作用是使溶液稳定在某个值，加入水或少量的酸和碱都不会对其产生影响，对于无水硫酸钠的量无需特别准确。

没有仔细分析，见笑了。胰岛素乃蛋白质也，属于两性物质，确实不能一概而论。以前没做过蛋白质，今天好好的研究了下，下面现学现卖，试着来说下该流动相的机理，欢迎战友们拍砖。
1. 首先，蛋白质与反相固定相的结合主要取决于蛋白质的极性，而低pH值能够使蛋白质质子化（pH为3.0时，几乎所有的蛋白质中的-COOH都不解离，也就是说，几乎所有的多肽和蛋白质在此时都显正电。）进而使其极性降低，与固定相结合增强。低pH还能抑制硅羟基的电离，降低拖尾。
2. 选择高浓度的硫酸钠，是为了增强胰岛素和固定相的疏水作用，也就是在一定程度上又增强了其保留时间。
另外，缓冲盐除了起缓冲作用还通过与胰岛素形成离子对进而改变其极性，这就是summerxq战友所说的，为什么硫酸钠称样量的改变会引起保留时间的变化。但0.4g会使结果差好几分钟感觉还是有点悬，因为两个条件不是在同一天做的吧，会不会有其他地方产生的影响不好说（这里我只是随便提下，我没做过，不再多说）

3. 选择乙腈，主要是考虑该条件在低波长下检测，乙腈的截止波长190nm，能够降低干扰，增强检测的灵敏度。并且乙腈粘度低，色谱峰宽小。