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标题:[讨论帖] 蒸发光散射检测器和蒸发光散射检测技术的讨论

wanglaoshi[使用道具]
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[讨论帖] 蒸发光散射检测器和蒸发光散射检测技术的讨论

[讨论帖] 蒸发光散射检测器和蒸发光散射检测技术的讨论


蒸发光散射检测器ELSD和蒸发光散射检测技术已经逐渐应用于药物分析领域(中药质量控制和化学药品分析)。
但是,作为一项相对较新的技术(虽然技术形成较早,但在国内药物分析中应用较晚),业内人士对其了解相对其他常用技术可能还较少。
随着中国药典2005版在高效液相色谱法中收入ELSD作为检测器,相信ELSD的销售商(美国Alltech、法国公司迪马代理、以及Waters ELSD 2020)乐开了花,但也少不了激烈的市场竞争。
但就此项技术本身,是否还存在一定的不完善之处、检测器的性能如何、HPLC-ELSD在实际应用过程中遇到的问题、ELSD和蒸发光散射技术在药物分析领域应用前景如何,期待各位同仁发表自己的看法,观点和分享自己宝贵的经验,期待中...
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HPLC使者[使用道具]
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我们有一台Alltech ELSD 2000,也许是因为蒸发光散射技术本身的问题,重现性特别差。还好他又推出新的型号,据说可以提高灵敏度几个数量级。
在方法学学研究时,更是没法做。关于含量测定,精密度应该按峰面积计算,还是应给以面积的对数计算呢?
不过蒸发光自有它的优势,可以节省很多成本,另外他还可以检测柱流失。
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owanaka[使用道具]
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蒸发光检测器属于质量检测器,理论上可以检测到挥发性低于流动相的任何物质,但对有紫外吸收的样品组份检测灵敏度比较底,重现性比较差(出厂要求重现性RSD<6%即可),现常用于检测没有紫外吸收的物质。
主要原理是,流动相及组份在蒸发室,先被雾化,流动相蒸发,组份形成气溶胶,然后进入检测室,用激光照射照射气溶胶而产生光散射,测定光散射的光强而获得信号。
组份质量(m)与散射光强(I)的关系为:lgI=b·lgm+lgk
k和b是与蒸发室温度及流动相性质等试验条件有关的常数。
剩下的就是一些注意事项和简单保养的问题,比如流动相中不能有盐,使用前先升温给气,再进流动相,使用完后先停流动相,后降温,最后停气,光机。
最后说明一下,使用完毕后可将流动相改为水及甲醇,调节温度及气流量冲洗蒸发室,这样可以增加使用寿命,降低噪音。
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wanglaoshi[使用道具]
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楼上朋友所说“我们有一台Alltech ELSD 2000,也许是因为蒸发光散射技术本身的问题,重现性特别差。在方法学学研究时,更是没法做。”

我想您指的重现性较差,可能是说峰面积的重现性比较差吧。如果在每天测定中均采用随行对照品进行校对,含量的重现性还可以说得过去。

我个人认为气体的流速对峰面积的影响非常大,所以如果您使用纯净的气源,精准的气体流速控制,至少在一天内的重现性不成问题。

根据ELSD的工作原理,必须使用对数方程外标两点法进行计算。但是,在实际应用过程中,如果对照品浓度和被测样品浓度较为接近,直接采用峰面积计算也不会有显著性的影响(尽管其不是合理的方法)。
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wanglaoshi[使用道具]
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另外,有没有朋友用过法国产的ELSD,可否谈一下看法?
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pencil菲[使用道具]
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比较赞成楼主的说法,ELSD很多人都说它重现性很差,其实我根据我自己的经验,重现性差一般应该是指其峰面积重现性较差(和UV比较),但 其色谱条件的重现性还是比较稳定的。至于标准曲线的做法,我曾经做过一系列的比较实验,也查询了一些资料,目前尚没有定论到底以峰面积和浓度直接做线性还是用自然对数还是以常用对数,三种方法都有。至于我们在实验中应该如何做线性,个人认为:不必拘泥,首先用峰面积和浓度直接做线性,如果相关系数不好,再尝试用对数关系(自然对数或常用对数)。一般都可以解决问题,不象那位同学说的方法学根本没法做,应该还是可以做的。至于楼主所说的,对照品和供试品溶液接近时可直接用峰面积计算,我不是很认同,当很接近时,可以考虑做一个比较窄的范围做线性,你如果直接用两点法做计算的话,必须得有一些数据支持,否则文章是很难发表的,也没有说服力,很容易被人质问,至于做随行对照的问题,按正规要求,不只ELSD,其他检测器的液相也应该这样做,只是因为仪器相对的稳定性所以大家都不做,对于ELSD当然做随行对照最好,至于是否一定要做,我觉得如果是仪器一直都是你一个人在用,而且条件没有变,预热也够充分,那么不做也行,但是这只是考察了自己的一个实验而已,不敢建议大家都不做,在您自己做实验时建议你还是做随行对照的好,也好心里面有底,免得造成不好的影响,呵呵。建议做随行对照。
谈到ELSE仪器的使用上,也有一些体会,但一时难以细细道来,主要就是雾化温度和气体流速的设置上,如果这两个参数设置合理,一般情况下都不会有什么问题,大部分的问题都是出在温度和流速设置不合理上。基线噪音的出现也多是因为两个参数设置不合理而导致雾化器漂移管污染那就只好清洗了,也有个别人因为操作失误而导致问题的但不多见,一般仪器厂商提高的参数设置只能用来参考,实际实验时很少完全和他提供的条件一致的,多比他提供的参数稍微高些,开始设置温度建议高些,如果基线没问题再慢慢调整到最佳温度流速。
再有,就是因为ELSD为质量型检测器,所以样品的预处理就相对更重要些,尽可能地分离纯化将会使你的方法学更容易建立,太多的成分在里面容易干扰正常检测。
本人只用过ALTECH 2000,其他牌子的ELSD只是在展会上见过,遗憾。见到一个内置工作站的ELSD介绍,觉得不错,但没用过,不知道可有朋友用过,感觉如何?如果不错,倒可以考虑购买,呵呵
暂时就想到这些吧,一些拙见供大家参考。
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zzzz[使用道具]
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法国的蒸发光散射检测器本人用过,Sedex-55型,Sedex-75型,都用过,也有五年多的历史了。主要用于中药成分的含量测定,也作过麦芽糖。感觉其重现性RSD达到3%以下没问题。同时该品牌ELSD采用超地温雾化技术,蒸发室温度一般低于50摄氏度,我一般用40左右,我曾经做过人参皂苷Rg1与Rb1的标准曲线几乎重合,则也充分证明其为质量型检测器,曾经做过中药注射剂的指纹图谱,在同一机器,同一牌号色谱主的情况下重现性较紫外好得多。但更换色谱柱峰形变化较大。
ALTECH 2000本人也接触过,知道其不是同一天其样品峰面积差异相当大。
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wanglaoshi[使用道具]
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回复 #7 zzzz 的帖子

这位朋友所说“感觉其重现性RSD达到3%以下没问题。”

不知您指的是不是含量的日内重现性,还是峰面积的日内重现性,日间的峰面积精密度不知您是否注意过。我使用Alltech500时,有时峰面积的日间RSD会超过10%。不知道Sedex系列怎么样。

您所说的“我曾经做过人参皂苷Rg1与Rb1的标准曲线几乎重合,则也充分证明其为质量型检测器,”

我个人认为:ELSD可以称作是质量型检测器,但是其并不能被称作通用型质量检测器。人参皂苷Rg1与Rb1同属于皂苷类成分,分子结构比较类似,所以在ELSD的响应上可能比较相近,但是如果被分析的两种组分分子量接近,但是分子结构相差比较大大话,根据我本人的经验,两种组分在ELSd上的响应值可能会差得比较远。并且和分子量没有明显的相关关系。

Sedex系列和Alltech2000同属可分流型ELSD,两种检测器您都接触过,不知您对ELSD的分流装置的应用有何感想,呵呵..........
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粉色萤火虫[使用道具]
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前段时间,中国药品生物制品检定所抗生素室的专业网站 抗生素工作网站 上专门进行了有关“应用蒸发光散射检测器进行抗生素药品质量分析”的专题讨论,感兴趣的战友不妨去看看!cuturl('http://www.antibiotic.cn/dvbbs/list.asp?boardid=14')
相信对大家会有所帮助!!
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wanglaoshi[使用道具]
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回复 #9 粉色萤火虫 的帖子

谢谢萤火虫战友的提醒,浙江药检所抗生素室曾经在园子里贴过他们在应用
ELSD分析抗生素时的体会:
cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=117&id=1862637&sty=3&keywords=%D3%A6%D3%C3%D5%F4%B7%A2%B9%E2%C9%A2%C9%E4%BC%EC%B2%E2%C6%F7%BD%F8%D0%D0%BF%B9%C9%FA%CB%D8%D2%A9%C6%B7%D6%CA%C1%BF%B7%D6%CE%F6')
好像就是您贴的:)
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