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标题:[求助]HPLC空白有干扰

yes4[使用道具]
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发表于 2011-11-16 14:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]HPLC空白有干扰

[求助]HPLC空白有干扰


各位大侠，现在遇到一个很棘手的问题。按照USP标准检测有关物质，我做了很多次了，空白溶液中始终有干扰，基本上主峰保留时间15.33时，空白就会出一个15.13的峰，做有关物质时主峰面积为4万多，尚可忍受，但做检测限时就存在问题了。主峰面积和这个空白的面积相差无几，要怎么处理啊？始终困扰！求助各位大侠！***啊！
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Ao7[使用道具]
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发表于 2011-11-16 14:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 yes4 于 2011-11-16 14:26 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
[求助]HPLC空白有干扰


各位大侠，现在遇到一个很棘手的问题。按照USP标准检测有关物质，我做了很多次了，空白溶液中始终有干扰，基本上主峰保留时间15.33时，空白就会出一个15.13的峰，做有关物质时主峰面积为4万多，尚可忍受，但 ...

拙见！

有这样几点需要考虑

1,15.13min的峰是不是就仅仅是空白的峰？考虑过残留的影响吗（多次进样重现性如何）？考虑过滤膜过滤时引入杂质吗（需要做些实验进行验证排除）？是否会是所用试剂的影响（更换试剂或者重新配制流动相看看）？或者有可能是进样针，柱筛板等的残留或影响？

2，按照您的说法，检测限有可能是3倍或5倍噪音。但是，在实际控制中，有必要把检测限定的如此之低吗？完全可以把检测限提高，只要合乎质量标准的相关验证。
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H2O[使用道具]
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发表于 2011-11-16 14:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
可能是：

1.流动相的问题，主要是水的问题多一些。因为我们以前也遇到同样的问题。在主峰的后面会鼓一个很大的鬼峰。后来换成注射用水就好了。你可以将水相换成注射用水试试，如果没有买瓶装的娃哈哈或者屈臣氏也可以。

2.进样器的残留，这个问题你只要重复的进空白溶剂，多针之后如果该峰的面积变小，那说明就是进样器里有其他物质的残留，清洗进样器即可

3. 看看你的第一针，如果没有这个峰，而后面都有这个峰的话那么很可能是杂质没有完全走出来，调整哈时间让样多跑一会儿就OK了。

4. 同楼上所说，有可能是滤膜的影响。但是据我了解，只要你使用的不是很差的滤膜，一般是不会引入杂质的。除非是被污染的！

检测限的问题的话，我个人认为现在的实验条件好了，仪器的精密度都达的到。可以把检测限定到3倍的噪音。对于申报显然是有利的！

谢谢！个人愚见！菜鸟一只，尚在学灰！
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刘白白[使用道具]
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发表于 2011-11-16 14:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
某些样品在柱效不甚稳定的前提下可能会出现您所述的这种问题，我做过一个测定8羟基鸟苷（尿样）时在进样空白即出现杂峰，当时的处理方法是使用Milli Q持续冲洗色谱柱，连续做了12个小时之后，空白进样正常
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66小飞侠[使用道具]
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发表于 2011-11-16 14:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我们这几天一个品种也遇到了这样的问题;你要一步一步的排查1.换仪器，排出仪器2换色谱柱3.换水，如由纯化水换为注射用水或别的4.换有机相的品牌5.换流动相盐的批号或品牌；我们最终确认是流动相的盐的问题
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vera+[使用道具]
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发表于 2011-11-16 14:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

遇到过相似的问题，最终确定为滤膜的问题
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minran_1980[使用道具]
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发表于 2011-11-16 14:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
遇到过相似的问题，最终确定为滤膜的问题

=====================================

一个来源于溶液或溶剂的纯度

一个来源于操作过程以及操作使用的仪器设备等

还就是LC系统污染造成
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考拉乌拉拉[使用道具]
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发表于 2011-11-16 14:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
是不是换根柱子？
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yes4[使用道具]
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发表于 2011-11-16 14:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢大家的建议。最近两天一直在查找原因。以为是我的空白被污染了或者进样针有残留。结果我进注射用水未出现，进流动相组成中的磷酸盐未出现。将注射用水弃去，用那个进样瓶装流动相（与空白组成相同，比例不同），未出现峰。询问安捷伦售后，工程师也解释不清楚究竟是哪里脏了。初步确定是仪器的问题，而非我样品的问题。注：仪器和色谱柱都是新买的。大家对造成这个结果的原因不知有何高见？
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木槿[使用道具]
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发表于 2011-11-16 14:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 yes4 于 2011-11-16 14:30 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
谢谢大家的建议。最近两天一直在查找原因。以为是我的空白被污染了或者进样针有残留。结果我进注射用水未出现，进流动相组成中的磷酸盐未出现。将注射用水弃去，用那个进样瓶装流动相（与空白组成相同，比例不同），未出现峰。询 ...

用那个进样瓶装流动相（与空白组成相同，比例不同），未出现峰。？？？？？？

比例相同呢？为什么不做个比例相同的，感觉还是你操作问题。

那个峰很可能就是主成分的残留，浓度不一样时，同一种物质的保留时间是有差别的。
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