[求助]生物样品内标法和外标法会有区别吗？

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标题:[求助]生物样品内标法和外标法会有区别吗？

cocacola[使用道具]
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发表于 2011-11-16 17:24 资料个人空间短消息加为好友

小中大

[求助]生物样品内标法和外标法会有区别吗？

本人原来是做药理的,对分析不太了解,现请教大家
现在在做一药物的药代动力学和组织分布,以前查过文献发现有用外标法检测,大部分会用内标法(包括我师兄),由于我一次性出的样品量较大,如果加内标使得每针进的样品时间拖得太长,总实验时间变长，担心目标物很容易发生转换,不准确,所以我用的是外标法
现请教,以上这种情况用内标法和外标法对于整个实验有影响吗,我现在用外标法可不可以呢?(有点担心)，是不是用外标法会不被认可？望大家帮帮忙，谢谢

huifeng0516[使用道具]
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发表于 2011-11-16 17:25 资料个人空间短消息加为好友

小中大

呵呵，药代我倒是没做过。谈谈我的理解而已。请大家斧正。
一般做药代，样品都比较复杂，需要经过复杂的样品处理过程。在样品处理的过程中会导致目标待测物的损失。使用外标法测定，即使对照品使用样品处理的方法处理，也会导致对照品和样品损失的百分比不同，这样测出的结果当然不准确了。
如果是使用内标法的话，内标物和样品在一个溶液中，一同损失，损失的百分比是一样的。
根据内标法和外标法的计算公式，你会发现当然是内标法准确一些。
不知楼主是用HPLC做，还是用LC-MS做？用LC-MS做应该会快很多。
呵呵，我只是个外行，还请行家指点。

Ao7[使用道具]
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发表于 2011-11-16 17:26 资料个人空间短消息加为好友

小中大

谢谢，内标的确有优势，我用的是HPLC,但是根据实际情况我还是选择了外标法，假设我使用外标法后方法学各项指标都可以满足要求，这样的情况可以被认可吗？

vera+[使用道具]
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发表于 2011-11-16 17:26 资料个人空间短消息加为好友

小中大

内标法当然好一点，但实在找不到合适的内标的话，外标法也是可以接收的，但得有充分的理由。

damingxia0904[使用道具]
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发表于 2011-11-16 17:27 资料个人空间短消息加为好友

小中大

这种情况要看你的药物的回收率怎么样了，如果样品处理简单，比如说加有机溶剂离心，回收率很好，那样应该没问题。如果你采用萃取技术，且回收率不高，变动也比较大，还是用内标好些。分析时间长，可以选择适宜的内标。

cocacola[使用道具]
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发表于 2011-11-16 17:27 资料个人空间短消息加为好友

小中大

这种情况要看你的药物的回收率怎么样了，如果样品处理简单，比如说加有机溶剂离心，回收率很好，那样应该没问题。如果你采用萃取技术，且回收率不高，变动也比较大，还是用内标好些。分析时间长，可以选择适宜的内标。

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谢谢，我的组织样品和血浆样品处理方法都是简单的乙腈沉淀后离心进样，方法学如果都符合要求，这样用外标法进行试验是不是就没问题了啊

dog002[使用道具]
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发表于 2011-11-16 17:27 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我之前做时找不到合适的内标物，也用外标法，而且简单很多，你的样品处理会不会太简单了，用2倍体积的ACN沉淀才达到99.7%，一般还要经过萃取、吹干……这样生物样品会相对干净些。

october7[使用道具]
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发表于 2011-11-16 17:28 资料个人空间短消息加为好友

小中大

要看你的预处理方法了，如果是直接进样或者沉淀蛋白法，有可能外标法做出的结果精密度会更好，不过如果是夜夜萃取，操作步骤多，预处理过程会引入较多的误差。
我们实验室是做生物样品的，有时候有一千多个样品，但仍然选的是内标法，也没有觉得有多麻烦。

junhun[使用道具]
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