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标题:[讨论帖]HPLC法测定苦参碱和氧化苦参碱

yychen[使用道具]
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[讨论帖]HPLC法测定苦参碱和氧化苦参碱

[讨论帖]HPLC法测定苦参碱和氧化苦参碱


这是2005版本药典给出的含量测定方法!
【含量测定】 照高效液相色谱法(附录VI D)测定。
色谱条件与系统适用性试验 以氨基键合硅胶为填充剂;以乙腈-无水乙醇-3%磷酸溶液(80:10:10)为流动相;检测波长为220nm。理论板数按氧化苦参碱峰计算应不低于2000。
对照品溶液的制备 精密称取苦参碱对照品、氧化苦参碱对照适量,分别加乙腈-无水乙醇(80:20)溶解,制成每1ml含苦参碱0.05mg,氧化苦参碱0.15mg的溶液,即得。
供试品溶液的制备 取本品粉末(过三号筛)约0.3g,精密称定,置具塞锥形瓶中,加浓氨试液0.5ml,精密加入三氯甲烷20ml,密塞,称定重量,超声处理(功率250W,频率33kHz)30分钟,放冷,再称定重量,用三氯甲烷补足减失的重量,摇匀,滤过。精密量取续滤液5ml,通过中性氧化铝柱(100~200目,5g,内径1cm),依次以三氯甲烷、三氯甲烷-甲醇(7:3)各20ml洗脱,收集洗脱液,回收溶剂至干,残渣加无水乙醇适量使溶解,并转移至10ml量瓶中,加无水乙醇稀释至刻度,摇匀,即得。
测定法 分别精密吸取上述对照品溶液各5μl与供试品溶液5~10μl,注入液相色谱仪,测定,即得。
本品按干燥品计算,含苦参碱(C15H24N2O)和氧化苦参碱(C15H24N2O2)的总量不得少于1.2%。
安捷伦公司给出的图谱


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yychen[使用道具]
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事实上不同柱子对同一成分具有不同的保留性能。至少,我周围做过的人就有不同的结果,看我做的,用的极限的氨基柱,(250mm×4.6mm, 5μm)大家可以看到一个奇怪的现象,苦参碱和氧化苦参碱的出峰先后顺序都颠倒了。当然我还有ODS柱做过,也做出来了,如果大家积极参与,我可以贴出来。其中出峰时间7分多钟的是苦参碱,后面的是氧化苦参碱!


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yychen[使用道具]
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我还有些心得,因为苦参是我毕业课题的一部分,没毕业就不说多了,但液相部分,欢迎大家交流。把你的图谱贴出来!
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yychen[使用道具]
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回的人不多,没人做苦参吗?还是现在做中药的人少了
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含苦参制剂还有成分转化问题,表现为峰高比或峰面积比有变化。闲暇时交流......
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star#room[使用道具]
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你好,我现在也在做一个复方制剂中苦参药材中苦参碱及氧化苦参碱的含量测定,也用了NH2柱做了,结果与你一样(方法按2005年版药典),用ODS柱做氧化苦参碱在前,苦参碱在后。但我的样品中苦参碱的含量比氧化苦参碱的含量高得多,我很纳闷,请各位老师帮我分析一下,谢谢!
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qumm1985[使用道具]
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苦参碱和氧化苦参碱对色谱柱要求较高,选择性较强,曾经做一复方,差别甚大。
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xevin[使用道具]
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我毕业做的也是苦参碱色谱条件的选择:实验中曾试以甲醇:水:磷酸 (5:95:0.025) 没有出峰,甲醇:水:磷酸(30:70:0.025),甲醇:水:磷酸(50:50:0.025),乙腈:0.02 mol/L磷酸二氢钠水溶液(20:80),乙腈:0.02 mol/L磷酸二氢钠水溶液(10:90),效果均不理想,分离度不好,拖尾严重。 结果表明以甲醇:水(30:70)含0.1%三乙胺为流动相,分离效果好。


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所做的hplc含测是个很普通的试验,2组分的含量。注意2个问题:

(1)药材(药品)的供试品的提取,分离。

考虑到新手,要想成功的使最后的结果出理想的报告,平行取样不要少于5次。

而且该标准采用氧化雨柱层析做分离,不熟悉柱层析的工作者先要学习这个基本操作,洗脱下来的溶液直接影响结果。中成药(中药)的含量不像化学药那么简单,单一的溶解就可以完全制备好供试品溶液,而需要一定的提取分离技术,而简单的按布就班的把药典重复做,也是很难提取的,这里必须要多学习,因为上机hplc测定的是你提取出来的东西。

(2)系统适应性试验的操作。

那么要选择好该试验的色谱条件,是这个hplc的关键,按照原始的标准或者文献的数据,是很难做好该试验的。

1)流动相的调整: 先 根据对照品出峰的快慢,蜂行的好坏可适当调节比例。再试着进供试品溶液。若有杂志干扰,还需要进行调节。
有时候调节流速。
柱温一般不做调整,影响很小。

2)重复进对照品5针以上,使2组分的峰面积的RSD小于2.0%
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cocacola[使用道具]
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我是按2005版本药典给出的含量测定方法测定
【含量测定】 照高效液相色谱法(附录VI D)测定。
色谱条件与系统适用性试验 以氨基键合硅胶为填充剂;以乙腈-无水乙醇-3%磷酸溶液(80:10:10)为流动相;检测波长为208nm。
但是苦参碱和氧化苦参碱的峰严重的前延,对称因子为0.69,理论塔板7000多一点,增加3%磷酸溶液比例峰会尖一些,但是还是不能用,请问怎么能让峰形好一点,急!急!!急!!!
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