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标题:[求助]反相与正相的转化方法

tuuu2[使用道具]
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发表于 2011-11-23 16:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]反相与正相的转化方法

[求助]反相与正相的转化方法


本最近在用高效液相做维生素D2微粒的含量测定，用的是反相，流动相为：甲醇：水=95：5

柱子为C18柱，机器是大连依利特的，效果部是很好，想改成正相，用正己烷-正戊醇（997：3）为流动相，柱子为硅胶柱，但我本人菜鸟，没有转换经验，求转换方法，求高手指点！在此先谢过了......
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木槿[使用道具]
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发表于 2011-11-23 16:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

不是说反相流动相过度到正相？

用异丙醇就可以
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u234[使用道具]
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发表于 2011-11-23 16:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
提供几个思考的方向
1.一定要用正向吗?请分析参考文献说明或者提供更详细的反向不能分析的原因
2.反相过度到正相,溶剂本身有不互溶的问题,要用中间的过度溶剂.比如异丙醇.让系统内的溶剂从高极性变成低极性.你需要确认需多少体积冲洗及流速还有溶剂互溶的问题.
3.因为常用的还是反相,之后你还要变回去,别人才能用.
4.注意柱子在反相就平衡好之后就要拆下来.不然柱子毁了就不好了.

暂时只想到这个...抛砖引玉
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wanglaoshi[使用道具]
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发表于 2011-11-23 16:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
搞个两通接上管路，先用甲醇把系统替换成甲醇，然后用异丙醇替换甲醇，注意异丙醇压力较高，流速调低点。然后换上硅胶柱，用异丙醇清洗一会后，用正己烷-正戊醇（997：3）替换异丙醇，基线平稳后就可以进样了。
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00无名指00[使用道具]
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发表于 2011-11-23 16:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

取下滤柱，接上两通，然后用水把系统替换成水，然后用异丙醇替换甲醇，使用异丙醇时流速较低(一般为0.2-0.5)，即转换成正相
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tuuu2[使用道具]
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发表于 2011-11-23 16:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢各位前辈，还有个问题就是：如何确定异丙醇的冲洗体积？
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mamamiya[使用道具]
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发表于 2011-11-23 16:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
冲洗柱子一般没那么精准

一般1.0半小时都能解决问题

如果非要算的话，色谱柱相当于一个圆柱体，这个中学都学过这么算的吧，20-40倍柱体积也行
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kewanqi2011[使用道具]
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发表于 2011-11-23 16:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #6 tuuu2 的帖子

冲洗时只要保证整个系统完全处于异丙醇的环境应该就可以了
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flyxx05[使用道具]
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发表于 2011-11-23 16:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
用异丙醇过度，十五倍柱体积。
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刘白白[使用道具]
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发表于 2011-11-23 16:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

最好先去问一下厂家，因为大多数HPLC的正相和反相系统的隔垫是不一样的，正相流动相对反相的隔垫有一定的溶解性。如果是可以通用的，先用两通接上，然后用甲醇低流速冲洗系统，时间长点，然后用异丙醇，低流速，过渡时间长点，然后换上自己的流动相，先不用接柱子，冲洗一段时间，然后根据情况接色谱柱。记得做完以后，一定要冲回反相。
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