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标题:[求助]主色谱峰出现肩峰

考拉乌拉拉[使用道具]
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发表于 2011-11-25 11:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]主色谱峰出现肩峰

[求助]主色谱峰出现肩峰



最近在做一化药的系统适用性试验，流动相：磷酸盐缓冲液：乙腈=96:4，色谱柱为新的安捷伦色谱柱，之前做的峰形很好，但前几天再做时，主成分色谱峰出现肩峰，经下述处理，仍未改善。
1.重新配置对照品和流动相，仍有肩峰
2.更换其它色谱柱，仍有肩峰
3.不同梯度的甲醇-水冲洗色谱柱，仍有肩峰
4.异丙醇超声溶剂瓶中滤头，甲醇-水、乙腈冲洗管路，仍有肩峰
5.换用另一台岛津仪器，仍有肩峰
注：进样量5ul时峰形正常，进样量为10、20ul时均有肩峰，以上情况均如此。但药典要求进样量为20ul。
请教各位大侠，帮忙分析一下这到底是什么原因，该如何解决？
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yes4[使用道具]
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发表于 2011-11-25 11:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这个问题不是药典要求进样量的问题，药典要求20μl，你是可以把浓度增大一倍，然后进样10μl的，关键是进样量减小，峰能分的好点，一旦进样量增大就分不开！
照楼主所说，应该是你们色谱条件不行。更换色谱条件吧！至于你说以前能分的很好，那就不知道是什么问题了，液相呀，一切皆有可能！
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kewanqi2011[使用道具]
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发表于 2011-11-25 11:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

安捷伦的色谱柱未必很好，可以使用其他牌子的色谱柱，出现肩峰有可能是柱子出现问题了，当然也有可能是样品或是色谱条件不合适，需要自己对其简单的判断，然后进行排查，我想问题总是能找到的
至于进样量的问题，这不是主要原因，不要在纠缠
但是我想从你的情况看，可能是样品的问题或是色谱条件不太合适吧
可以尝试梯度看看
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wanglaoshi[使用道具]
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发表于 2011-11-25 11:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

1、进标样检测色谱柱柱效，观察峰型是否正常。
2、了解该色谱柱在上次出正常峰型后是否检测过其他的样品，如果检测过其他样品，怀疑该色谱柱被污染。
3、拆开色谱柱柱头，取下筛板用异丙醇超声10~20分钟，装回筛板，继续测试观察峰型是否正常。
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发表于 2011-11-25 11:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我觉得楼主已经排除了色谱柱，仪器和样品的原因了。
我觉得是流动相的问题，缓冲溶液配置不当或PH值调整不到位。若被测物质是弱酸，弱碱性的物质，一般来说色谱柱对这类物质载样量很小，才能获得好的峰形，即进样量对其峰形影响很大。也就是楼主所描述的那样，进5ul峰形还可以，进10ul，20ul峰形变差了。可能楼主的样品对pH值要求比较苛刻，所以楼主最好精确测定pH值。
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mamamiya[使用道具]
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发表于 2011-11-25 11:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
把样品溶液的溶剂换为流动相、或者控制溶剂中有机相的比例不超过20%。
试试。
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ladyhuahua[使用道具]
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发表于 2011-11-25 11:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

会不会是样品过载啊。
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biabiade[使用道具]
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发表于 2011-11-25 11:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
先要了解楼主的溶剂是什么，如果是甲醇或是已腈的话就有可能是溶剂的影响，最好在溶剂中加入适当的水相，如果没法加水相的话最好在开始的时候运行个梯度稀释一下样品中的有机相。可以试一下，我以前也遇到过类似的情况，就是这么解决的。
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发表于 2011-11-25 11:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

把色谱柱反接试一下！
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小野花[使用道具]
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发表于 2011-11-25 11:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

是不是溶解不完全啊？
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