小中大最近有个疑惑,就是离子对试剂的优劣对基线噪声的影响是否很大?
有经验的老师能否就您们使用离子对试剂的经验呢?
希望能够给初学者或是有疑问的色谱工作者一个借鉴,参考与学习的机会呢?谢谢大家
1、国内产的离子对试剂与国外产的离子对试剂质量对比,如何?
2、离子对试剂是否会影响基线噪声?
3、大家使用质量优异与劣质的离子对试剂配制流动相,都发生了哪些现象呢?是否会出现有的可以检测出杂质,有的检测不出呢?即是否会发生色谱选择性的变化呢?
关于离子对试剂在国外专门有人做过研究,有关离子对试剂在反相色谱中分离的机理,以及影响因素都有。
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1.关于国产和国外的离子对试剂质量,我们做过比较,国产的质量只能说一般般,在普通条件下可以使用,但是如果在极端的条件下,会出现杂质峰。进口的不存在这个问题,而且离子对试剂是很费钱的,400多一小瓶没几次就用完了
2.这个看离子对在紫外区是否有吸收了,大部分情况下在紫外末端会有吸收的,就好比某些缓冲盐在低波长不能使用(乙酸盐缓冲液)
3.关键是如果做有关物质的话,你试剂不纯的话,走空白都会出现鬼峰,这样的话你去判定结果的时候会非常的麻烦,一般等度条件很少出现这种情况,最让人头疼的是在梯度条件下出现的鬼峰。
具体你可以参考以下的文章
Knox JH, Hartwick RA. Mechanism of ion-pair liquid chromatography of amines, neutrals, zwitterions and acids using anionic hetaerons[J]. Journal of Chromatography A, 1981,204: 3-21.
而离子对试剂在试剂操作中注意的因素有
第一离子对的浓度,这个一般情况下在满足要求的前提下,越低越好
第二 离子对的pH,这个是进行分离的最关键的因素,而只能在缓冲液中测定pH,千万不要混合以后测定,普通的pH是不能在有机相中测定pH的。
第三,如果使用离子对试剂,一定注意平衡时间,正常的话在60-90分钟才能达到彻底的平衡,还有在实验结束以后要冲洗超过2个小时。
第四,我的经验,用离子对的实验所用的柱子一定要和其他的非离子对的分开,不然你的柱子会不可逆的损伤!