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标题:[求助]关于标准品标化的问题

daod[使用道具]
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发表于 2011-11-25 13:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]关于标准品标化的问题

[求助]关于标准品标化的问题


我在做一个化药的一类新药,没有标准品,所以自制了标准品,可是关于标化的问题一直弄不太明白,想请教一下大家.
我一直认为应该是我用各种能用到的方法来测定它的含量,然后取一下平均值就可以了.
我原本是打算用非水滴定,HPLC(UV检测器),HPLC(蒸发光检测器)三种方法来确定一下含量的.可是昨天碰到了一个前辈,他说这么做是错误的,应该用HPLC的几种检测器都来做一下,然后从中选出结果最好的那个,比如说是UV检测器,然后用同一个流动相,同一根柱子,一个波长,分别在三台不同厂家生产的HPLC仪上测定,再取其平均值才是标准品的含量.有这种说法吗?
我个人觉得那我还不如用两个不同的流动相在同一台机器上测定,然后取其平均值呢?
不知道有哪为战友作过类似的项目,能不能给点建议?谢谢了!
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大白菜[使用道具]
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发表于 2011-11-25 13:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我个人觉得那我还不如用两个不同的流动相在同一台机器上测定,然后取其平均值呢?

我不理解你想法有什么依据吗???
流动相不同的话,色谱条件不是变了吗?怎么还能取其平均值呢?
新手,望指教!
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junhun[使用道具]
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发表于 2011-11-25 13:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
这是另外一个前辈告诉我的,原因她没有说.
我想原因应该是使用HPLC(UV检测器),对一个新药建立含量测定方法,本身这个条件就是在不断的摸索过程中建立起来的.你不能说你建立的这个方法是最好的,只不过是这个方法满足了各方面的要求,这个方法你可以使用而已.肯定应该还存在着和你这个条件更好或者是差不多一样的条件.就拿我这个药来说吧,我就找到了两个都不错的条件,缓冲盐不一样,PH值也不一样.但效果都不错,后来我就选了理论塔板数稍高一点的那个条件.
对于标准品的标化,用HPLC的话只能用面积归一化法了,我个人觉得用不同的条件出的峰肯定会略有差别的,我用两个不同的条件分别来测定,这样可以增大可靠性,这就有点象从中草药中提取分离单体化合物一样(不知道你在中草药提取分离方面怎么样?)一般在分离中草药中的单体化合物时,当你怀疑用一个展开剂跑出来的点是个单体的话,一般你还需要换1-2种完全不同的展开剂进行展开,或者要把硅胶换成聚酰胺或葡聚糖凝胶什么的.如果在变换了各种条件仍然是一个点,那基本就可以确定是个单体化合物了,然后再去打谱确定结构.
我个人觉得HPLC的条件的建立原理和这个差不多,对于纯品应该多换几个条件来确定含量.这只是我个人的想法,也没什么根据的,仅供参考!
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zsxan1990[使用道具]
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发表于 2011-11-25 13:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

那个前辈的说法有点所答非所问。
楼上的说法我赞成。首先要确定你的标准品的含量，至少应该做正相，反相，DAD检测。
至于不同仪器，不同实验室间的测试是另外一回事。
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大白菜[使用道具]
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发表于 2011-11-25 13:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
至于怎么确认在一个特定色谱条件下测出的纯品含量最高？
也就是说怎么知道这个色谱条件是最好的？不知道目前有没有研究？
新手上路，望前辈们指教！
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2541[使用道具]
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发表于 2011-11-25 13:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我认为只要做该标准品含量测定的方法学研究即可,拿出一套严密的验证方案.
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ladyhuahua[使用道具]
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发表于 2011-11-25 13:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也来说两句。一般来讲，用HPLC法来测定含量，是需要有对照品的，不管外标法、内标法都需要。而你做的是一类新药，肯定没有对照品。所以，需要有一个方法，作方法学研究。但肯定不能是HPLC法。可以用非水滴定法，用电位指示终点。作出滴定曲线。如果有合适的指示剂，可以比较一下，如果滴定终点电位与指示剂变色终点能够统一，也可用指示剂指示终点。但仍要做线性、精密度、稳定性、回收率等资料。必要时，需要作影响因素、加速、长期试验考察对照品的稳定性。以上是我个人的一点看法，希望同战友们交流。
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发表于 2011-11-25 13:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我今天就我的这个问题去咨询了我们省药检所化药室的主任,她是这样回答的:
1、要用两个不同的方法来标化。比如说我这个原料药就可以采用非水滴定（容量分析法）和HPLC法（仪器分析法）。
2、HPLC法必须采用两个完全不同的条件来分别测定，用面积归一化法来计算就可以了。
所谓不同的条件包括：
⑴完全不同的流动相（比如说我这个项目，目前我已经摸索到了两个不同的条件，虽然都是用的乙睛-水系统，但缓冲盐和PH值分别都是不同的，所以就可以使用这两个条件了。）
⑵不同品牌的色谱柱（就是换根柱子，至于国产还是进口的倒是无所谓）
⑶不同品牌的HPLC色谱仪（如果条件实在不允许，在同一台仪器上用不同的流动相和不同的色谱柱进行测定也可以）
3、取三个方法含量的平均值就可以了。（我现在已经用非水和一种HPLC条件测定过了，基本含量差距不大，如果差距很大，那就取含量低的那个方法的平均值）
4、HPLC法测定含量还是用UV检测器为佳，不需要使用其他检测器测定。
5、在药品的研制过程中（包括新药的临床前申报），作为研究单位，只要你用确实可靠的方法确定了你的标准品的含量就可以了。等到药品被批准上市的话，你提供标准品中检所会测定含量的。最后的含量还是由中检所确定的。基本上象上列方法测定标准品的含量是可以满足申报新药的要求的。
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发表于 2011-11-25 13:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这两个方法我觉得都不妥，你用HPLC测定标准品的含量，那么用什么做对照呢？这是外标法的问题；如果你用内标法，那么内标怎么选？是不是合适呢？专家也会提出这样的问题；那么你会说用归一化法，可是这个方法本来就存在着条件摸索的问题，你采用的液相条件能确定把所有的杂质给分离吗？所以现在化药一般决不会用归一化法来测含量的。
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所以现在化药一般决不会用归一化法来测含量的？。
=============
不知道这位朋友怎么下的这个结论，也许是我接触的新药研发比较少，完美的标准品标定在新药研究中（比较严格的研究所我就不了解了）是很少那样做的，基本就是象楼主说的那个化药室的主任所说的，大家一般都是只要你法定机构说了这样做可以那就决不愿意多做工作的，呵呵，反正我是这个样子。最后法定标准品的含量是要由中检所给出的，不是你申报单位说了算。我想您说的化药一般绝不会用归一化法来测含量可能意思是指的一般质量标准中的含量测定，那是不能用归一法。但标准品的标定和含量测定应该是两个不同的概念。我以前做植化分离得到的单体给纯度时，也一般就是只用归一法，只是用不同的色谱条件、不同色谱柱等。
至于是否应该用内标法来标定标准品的纯度，我也不清楚，只是很少听到谁那么做，有做过这方面工作的朋友请介绍下您的经验，谢谢！
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星星点灯[使用道具]
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发表于 2011-11-25 13:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
省药检所化药室的主任的回答是基本正确的，我们这里基本是这样做的。
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