液质联用

我打算用内标的方法定量,可是缺乏这方面的经验.我看帖子上说做标准曲线内标浓度为标曲最高浓度的1\3~1\5,那么在计算CCα和CCβ的时候,我设定0.3,0.45,0.6ppb,内标加多少呢,做添加回收的时候内标要又加多少呢,这有讲究吗???大家进来讨论一下哈!!!
        如果要做标准曲线,做多残留的话,是用混和标准液做呢,还是一个一个药物做.大家来交流一下经验啊!!!

[ 本帖最后由 zhufangwei 于 2007-11-13 21:18 编辑 ]

在残留分析中，加入同位素内标物多是从实验一开始就加进去。
所以，加入内标物可以校正整个分析全过程可能产生的误差。
若做得好，理论上用内标物校正后回收率应该是100%。
但在实际分析过程中，特别是在动物源食品中的药残分析，由于基质的复杂性所以回收率一般不会太好。
若不用内标，回收率往往波动很大，甚至超出残留分析回收率的允许范围。
所以，加入内标就是为了改善回收率和方法的稳定性。

实际操作时，不考虑内标的回收。
将被测物的值直接与内标值比较计算。

在实验中内标还有一个功能，那就是检验你这次实验是否正常。
如果在最后的仪器检测中内标都没出来，你就需要好好检查一下你的实验那里出问题了，
如：试剂、净化柱、仪器等。

我打算用内标的方法定量,可是缺乏这方面的经验.我看帖子上说做标准曲线内标浓度为标曲最高浓度的1\3~1\5,那么在计算CCα和CCβ的时候,我设定0.3,0.45,0.6ppb,内标加多少呢,做添加回收的时候内标要又加多少呢,这有讲究吗???大家进来讨论一下哈!!!
        如果要做标准曲线,做多残留的话,是用混和标准液做呢,还是一个一个药物做.大家来交流一下经验啊!!!

内标是用来标定样品前处理过程和仪器的稳定性的，如标定样品前处理过程和仪器的稳定性，在样品未处理前加入，如仅标定仪器的稳定性，可在样品处理后加入。标准曲线和样品内标为同一浓度。内标的加入量同化合物和内标的质谱响应有关，因为内标法定量用的是目标化合物和内标的峰面积比或峰高比，最高点的比值不能太大，最低点的比值不能太小，比值太小太大都会影响定量的准确性。如果线性范围比较窄，内标一般为标曲最高点化合物响应值的1/2~2/3之间时的浓度，如果线性范围比较宽，内标浓度应适当降低，照顾低点的响应。
标准曲线,做多残留的话,可以用混和标准液，不会相互干扰。
内标一般选择同目标化合物性质相近的化合物，并且稳定，系统无吸附的化合物。

标准曲线和样品内标一定要为同一浓度吗?我在处理样品过后打算浓缩5倍的,那么做标准曲线的时候是在添加浓度5倍的基础上做的

考虑到这条曲线的线性范围比较小，因此对内标的量要求不高，只要浓度不在检测限附近就好（以免增加误差）。如果是多组分检测，当然是用混标好呀，可以节省很多时间呢。

我的意思是说我做的标准曲线是放大5倍(相对于添加的药物浓度,因为我做前处理之后要浓缩的),那么添加在组织里的内标浓度是不是相对与标曲用的内标浓度缩小5倍???

你说得对，在测定时，样品和内标在一个浓度范围是最好的。

做残留分析一般线性范围不必太宽，通常2个数量级就够了。
一般根据被测物MRL，线性在1/2MRL～50MRL。
就色－质分析而言，内标物选择有2种，
一种是与被测物相同化合物的氘代物，
另一种是与被测物性质相近的化合物，如同系物。
对于残留分析，最好选用氘代物。
内标物的响应值与不测物的响应值常常不一样，具体到内标物的浓度，通常可以这样确定：
选择其某一浓度内标物的峰面积或峰高与被测物MRL峰面积或峰高相当即可（一般可比MRL稍高一些）。
因为，这个浓度与被测物的峰面积或峰高接近，定量较准，而且检测时这个值又比较稳定。

每种被测物用一个对应的氘代内标物定量最好，但实现起来比较困难。
所以，性质相近的一类被测物用一个内标物就可以了。
但如果性质相差比较大，就应该一类被测物选一个内标物。

具体浓度应根据样品的实际浓度来定,一般在其附近就行了.

被您绕来绕去的，差点搞糊涂。
内标法是消除整个实验过程的系统误差,包括前处理过程,仪器分析方法等,所以内标是在样品前处理前加入，不管是您用来做标准曲线的样品还是代测样品。

请注意，用来做标准曲线的样品是将标准物添加在和待测样品相同基质的空白基质中做的，而不是直接用标准溶液做的。所以不要考虑什么浓缩5倍，10倍的问题。希望我的解释您能考虑。