液相色谱

C18反相柱 ，如何分离极性相近的物质：
分离柴胡皂苷A和D,用的是梯度：流动相A乙腈 B 为水
                 A                  B
0-50min    25-90       75-10
50-55     90             10
55-60    90-25         10-75
60-70     25          75
柴胡皂苷A和D能够很好的分离，但在柴胡皂苷A后面有个小峰，分离度为1，怎么分开？柴胡皂苷A的出峰时间是20Min左右。

梯度、流动相pH控制。

主要从流动相的pH、梯度变化，另外还有一点就是色谱柱的选择也很重要的。

还得变化梯度  不然流动相换换 进个样 试试

把流动相pH再调调，而且在未分开的地方梯度缓点试试。

在梯度保持不变的情况下，可更换不同品牌的色谱柱试下，或者适当降低下柱温，看看是否有效果。

看分不开的峰出现在哪个梯度段，重点减缓该段梯度并在梯度减缓的前提下考虑降低该段梯度前面的初始浓度。

选择合适的梯度，可以让梯度上升的缓慢一点，在出峰时保持梯度不变。选择合适的柱子，这一点也很重要，柱身要长。还有就是你TFA，碳酸氢氨，氨水体系等体系，你都试试，看看哪种体系最好。

强调一点：C18柱是统称，其实其合成原料，生产工艺每个厂家都有不同，即使一个厂家也会有不同的品种，导致这些色谱柱的立体选择性，对特定物质的保留能力有较大差别！

比较同意楼上的观点，你可以试一下富士的Diol类的填料，贵是贵了点，但是分离的效果非常好！比C18分离更有优势！