western-blot实验常见问题及解决对策

常见问题                                                                                  解决对策

两块玻璃板之间灌胶,胶总是不平                    玻璃没有洗干净,应该洗得很干净
                                                                         过硫酸铵和TEMED加量相对较多
                                                                                       加完试剂后应摇匀
         
总是漏胶                                                       避免玻璃边缘(与胶条接触处)破损
                                                                 将两块玻璃板摆放对齐,底部处于同一平面

膜上有明显气泡                                                        操作时将气泡完全排除
                                                                                 靠膜一侧的滤纸应铺平

特异性低                                                                               优化一抗
                                                                                  提高一抗和二抗的稀释度
                                                                            降低SDS-PAGE中蛋白的上样量

背景高                                                                                      优化封闭液
                                                                             优化洗涤缓冲液,增加洗涤次数
                                                                                          减少曝光时间
           
信号低                                                                                      优化一抗
                                                                                             浓缩样品
                                                                          选择更高灵敏度的发光液,如engreen的enlight等。