细胞世界

Entranster-in vivo体内转染试剂
                                                                                 局部注射的参考方法
1.局部注射的总注射剂量的确定
首先，必须确定局部注射的总注射量（最终注射量）。这个注射量可以根据文献，也可以通过实际操作来确定。实际操作过程中，一般采用多点注射，比如3点注射的方法。从不同方向进针，以药液覆盖全部靶组织为目标。

2.各组分剂量的确定
总注射剂量确定以后，比如通常直径1cm的皮下肿瘤，其最大注射剂量为50ul左右，那么，根据说明书比例，各组分相应如下：
                                   RNA转染，50μl转染复合物的组成
50μl转染复合物        
核酸稀释液                       12.5μl (12.5μg)核酸
                                   12.5μl的10%葡萄糖溶液
       
转染试剂稀释液                6.25μl转染试剂
                                   12.5μl的10%葡萄糖溶液
                                        纯水6.25μl补足


                     DNA转染，50μl转染复合物的组成
50μl转染复合物        
核酸稀释液           6.25μl (6.25μg)核酸
                                  纯水6.25μl
                      12.5μl的10%葡萄糖溶液

转染试剂稀释液        12.5μl转染试剂
                           12.5μl的10%葡萄糖溶液


这是通常的各组分用量，如果条件允许，也可以少用或者不用葡萄糖溶液，以增加药液的量，达到更好的效果。但需要注意的是必须维持核酸和转染试剂的比例，RNA转染为：1ug(RNA):0.5ul(RNA体内转染试剂)；DNA转染为：1ug(DNA): 2ul(DNA体内转染试剂)。

3.核酸的稀释溶液
不论是质粒还是RNA粉末，建议用纯水稀释，并配制成1ug/ul浓度最好。如果由于某种原因，采用其它溶液稀释，可能会有部分沉淀产生。少量沉淀在动物体内不影响转染效果。

4.局部注射后的取样问题
由于局部注射容易造成药液分布不均，在注射的近端，药液浓度高，效果明细；远端，药液浓度低，效果低一些。所以，一方面，需要尽量将药液均匀覆盖全部靶组织，另一方面，后续实验取样时，在保证实验的情况下，尽量取注射区域附近的组织，不取或者少取药液覆盖差的组织，以增加实验效果。

[ 本帖最后由 dealer 于 2017-6-29 10:30 编辑 ]