小中大流式细胞周期检测操作步骤
1. 细胞培养：
取对数生长期的细胞，按1×106cells/ mL以1mL接种24孔板或2mL接种于6孔板内，进行所需的处理（比如加入药物），特定时间后终止培养，进行下一步的实验。
2. 细胞固定：
800rpm离心5min，收集细胞沉淀，弃上清，用预冷PBS洗涤两次，加入预冷75%乙醇，于4℃固定4h以上。
3. 细胞染色：
1500rpm离心5min，弃上清，以3mL的PBS洗涤一次，加入400uL溴化乙锭（PI，50ug/mL），100ul RNase A（100ug/mL ），4℃避光孵育30min。
4. 流式分析：
以标准程序用流式细胞仪检测，一般计数2~3万个细胞，结果用细胞周期拟和软件ModFit分析。
注：英格恩CCAA试剂盒基于PI染色(Propidium staining)方法进行细胞周期与细胞凋亡分析的试剂盒。PI染液即开即用，无需再用缓冲液配制，误差小；而且PI染液4℃存放，无需反复冻融，方便随时取用，试剂更稳定。英格恩CCAA试剂盒是不需要提前用RNA酶消化的超快型试剂盒，常用于贴壁或悬浮细胞的周期与凋亡检测。
