摘要
在Flash制备色谱中，反相分离模式是分离大多数极性化合物的首选分离方法。与其他分离模式相比，反相分离模式具有更好的普适性和便捷性，往往可以得到更令人满意的效果。在实际分离中，流动相的种类和强度对分离效果的影响是不容忽视的。本文比较了乙腈、甲醇和四氢呋喃这三种不同溶剂对分离同种样品产生的不同效果，并阐述了洗脱梯度的设置对分离进程的影响。

简介

图1. Snyder溶剂选择性三角形（引自参考文献1）

用于反相分离的溶剂类型可以有很多种（如图1所示），例如，根据极性大小排序：水<甲醇<乙腈<乙醇<四氢呋喃<异丙醇。由于时间等条件限制，我们不可能一次性尝试所有种类的溶剂，考虑到选择性、经济性及安全性等相关的因素，推荐优先尝试乙腈、甲醇和四氢呋喃这三种溶剂。由于这三种溶剂性质存在较大区别，通常会产生不一样的分离选择性，因此可以满足大部分样品的分离纯化需求。

实验部分
为了比较不同溶剂作为流动相的选择性差异，我们选择了乙腈、甲醇和四氢呋喃作为流动相对混合物样品（样品信息如图2所示）在SepaBeanTMmachine快速液相色谱系统上进行了分离纯化。实验参数参见表1。不同条件下的分离图谱如图3至图5所示。


图2. 混合物样品各组分的化学结构式

表1. Flash制备纯化实验参数

结果与讨论

图3. 乙腈-水体系作为流动相的样品分离图谱

图4. 甲醇-水体系作为流动相的样品分离图谱

图5. 四氢呋喃-水体系作为流动相的样品分离图谱

从上述分离图谱（图3至图5）可以比较直观的看到：乙腈、甲醇和四氢呋喃这三种常用有机溶剂在实际分离过程中存在的选择性差异。对于苯甲酸类衍生物（组分B和组分C），上述三种溶剂的洗脱效果是不同的。与甲醇相比，乙腈和四氢呋喃显示出更强的洗脱能力，因此样品混合物保留时间更短一些。然而，四氢呋喃对于组分B和组分C的分离效果不如其他两种溶剂。此外，对于有机盐酸盐类化合物（组分A），当选择甲醇作为洗脱溶剂时可以获得更好的分辨率和更合适的保留时间（如图4所示）。与之对比，四氢呋喃作为洗脱溶剂时组分A几乎不保留（如图5所示），而乙腈作为洗脱溶剂时组分A出现了裂峰现象（如图3所示）。

结论
在反相分离模式中，应当选择合适的溶剂作为流动相。选择洗脱溶剂时需要注意下列几点：
· 流动相粘度过大会造成系统压力过高，尤其在使用小粒径填料的分离柱时，应尽可选择粘度较小的溶剂。
· 所选流动相对于待分离化合物应有较好的溶解性，否则对分离效果及峰型的影响很大。
· 考虑到溶剂UV吸收问题，应尽量选择检测波长下没有吸收的溶剂，如四氢呋喃在紫外波长下有吸收，此时可考虑用乙腈或甲醇作为替代。
· 建议首先采用乙腈-水体系作为首选洗脱溶剂，其次考虑甲醇，最后尝试四氢呋喃作为替代进行尝试。

参考文献
(1)    J.W.Dolan, LCGC North America 28 (12), 1022-1027 (2010).

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常州三泰科技公司SepaFlash®Bond Series C18反相柱系列产品具有多种规格（参见表2）。

表2. SepaFlash® Bond Series C18系列反相柱参数

（填料:Ultra-pure irregular C18, 40-63μm, 90Å）

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