细胞因子微球检测技术之流式CBA技术 - 分析百问

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medicilon

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发表于 2018-10-29 09:22 资料个人空间短消息加为好友

细胞因子微球检测技术之流式CBA技术

免疫力是人体自身的防御机制，是人体识别和消灭外来侵入的任何异物，如病毒、细菌等，处理衰老、损伤、死亡、变性的自身细胞以及识别和处理体内突变细胞和病毒感染细胞的能力。细胞因子检测是判断机体免疫功能的一个重要指标，在疾病的诊断、病程观察、疗效判断及细胞因子治疗监测等方面作用较大。细胞因子可用来修补身体受损的组织和细胞，提升人体免疫力和药物的疗效，也是常见的大分子药物之一。
然而由于血液、细胞培养上清、积液中的细胞因子含量低、加上样本数量少，传统的ELISA方法无法满足多细胞因子检测。流式微球捕获芯片技术（Cytometric Bead Array，CBA），是一个基于流式细胞检测系统的多重蛋白定量检测、集ELISA和细胞流式技术优点为一身的液相蛋白检测技术。该技术整合了免疫微球、激光检测、信号处理及计算机运算等功能，能够对样本中的多个指标进行定性、定量检测。
美迪西不仅可以为客户提供采用ELISA系统对样品进行单一指标的细胞因子检测服务，还可以提供采用MSD、Luminex、流式CBA、Bio-Plex 200平台进行的单个或多个指标的细胞因子检测服务。
1、流式CBA细胞因子检测的工作原理：
（1）采用聚苯乙烯荧光微球连结特定的捕获抗体，捕捉待测物。每个CBA微球大小一致，具有特定的荧光强度，包被有适用于特定分析（如其它抗体或者可溶性蛋白）的特异性捕获抗体（Capture Antibody），提供了类似ELISA孔板的捕获表面；
（2）当微球和待测细胞因子样品溶液混合后，微球上的特异性抗体就与样品（血清、血浆或者细胞培养液）中相应的抗原或蛋白结合，然后加入荧光标记的检测抗体，就会形成“三明治”夹心复合物；
（3）最后通过流式细胞仪对特异性目的蛋白进行检测。
CBA的每种微球携带有不同强度的红色荧光，在流式细胞仪的FL3通道通过检测微球荧光强度的差异对目的蛋白定性；检测抗体带有PE荧光素标记，在流式细胞仪的FL2通道检测，通过检测抗体的PE荧光强度定量目的蛋白。
2、CBA的细胞因子检测操作步骤
（1）检测物与捕获微球共孵育；
（2）标记荧光探测试剂（FITC或PE标记）
（3）洗涤
（4）流式细胞仪检测；
（5）CBA分析软件批量数据分析。
3、流式CBA检测进行细胞因子检测的优势

（1）微量样品，只需5-50µl，所需的样本量只是传统的Elisa样本体积的1/6；

（2）分析灵敏度高达2.8pg/ml；
（3）液相中反应，同时检测多种蛋白，最多可同时对一个样本中的75个目的蛋白进行精确定量；
（4）标本制备和上机检测操作简单，整个流程只需要3.5小时，省时、省力；
（5）所有分析只需一组标准曲线；
（6）更好的线性度和更宽的检测范围（0-5000pg/ml）；
（7）流式荧光定量检测，避免酶联反应信号放大带来的假阳性；
（8）稳定性好、可重复性高；
（9）流式细胞仪和CBA软件自动分析。
4、流式CBA检测的样本：
血清、血浆、眼泪、房水、唾液、体腔灌洗液、细胞培养液上清、细胞裂解物等各种液相样本。
5、流式CBA检测的应用领域：
（1）细胞因子、炎症影子、趋化因子、酶等的浓度检测；
（2）细胞信号传导中磷酸化蛋白、凋亡相关蛋白定量分析；
（3）肿瘤研究；
（4）免疫疾病或传染疾病的辅助诊断和监控；
（5）药效评价、药物研发；
（6）疫苗研究；
（7）总体免疫功能分析等。
细胞因子检测技术包括免疫学方法、流式细胞技术、分子生物学及蛋白组学技术，通常使用酶联免疫分析技术ELISA来的定血清或血浆中的细胞因子，但是Elisa方法每次仅能测定一项细胞因子，而且每次所需要的样本来那个为1000µl的血清或血浆。要想获得多个细胞因子的结果，采血量就必须很多。
流式CBA技术可以实现对稀有样本、少量样本的细胞因子、抗体、抗原等多个指标的检测。流式细胞仪以其检测速度快、检测手段灵活、多指标、多参数、灵敏度高等特点已经成为基础科研、临床检测等必不可少的技术手段。

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