神经营养因子是一类对神经细胞的生长与生存具有调控作用的多肽因子，在胚胎发育、神经细胞分化以及损伤组织再生等方面均发挥关键作用，研究表明TMEFF2很可能是一种新的神经营养因子。有研究者利用酵母双杂交文库构建技术筛选了与TMEFF2相互作用蛋白，以探究TMEFF2基因与神经发育的关系。

蛋白质相互作用是众多生物学功能的基础，其中包括细胞凋亡、新陈代谢等。酵母双杂交技术是一项研究蛋白质的相互作用的技术，对于揭示蛋白功能及研究相关生物学具有重要的意义。通过酵母双杂交文库构建技术可以筛选相互作用的蛋白，具有以下特点：①高效:转化方法简单、转化效率高、便于操作；②灵敏:可检测蛋白质之间的微弱作用；③真实:酵母细胞是真核细胞，融合蛋白之间的相互作用是在真核细胞核内进行的，蛋白质经过翻译后的修饰，多数可以保持蛋白质的天然空间构象和折叠状态，接近其真实的生理状态，一定程度上可代表其在细胞内真实情况；④简捷:只需要构建诱饵表达载体，可以省略蛋白质抽提纯化或抗体制备的繁琐步骤。美迪西提供酵母双杂交服务，具有独立优质实验室，专业实验人员，提供详细的酵母双杂交实验步骤、原始数据和图片、结果分析，可以出具权威检测数据报告。

研究者通过构建单侧视网膜摘除的鸽模型，用消减抑制杂交法建立了鸽左前脑的cDNA差异表达文库，并且通过反Northern杂交筛选出一些差异表达的EST片段[1]。研究者从中选取了一条EST片段，通过RACE法成功的克隆了其全长基因，且经同源性比较证实为TMEFF2基因。为了探究TMEFF2基因的功能，研究者将其EGF样功能域作为酵母双杂交的“诱饵”，对正常人脑cDNA文库进行筛选，经DNA序列测定证实为Celsr2、G3BP2、agrin、prosaposin等，因此初步确定TMEFF2基因与神经发育及信号转导相关。

为了更进一步探究TMEFF2的功能和作用机理，并寻找与之相互作用的蛋白，研究者首先构建了TMEFF2基因胞内域的酵母双杂交“诱饵”表达载体，经验证无自激活现象并且对酵母菌株无明显毒性，western印迹对蛋白表达的定性分析显示目的蛋白表达正确；其次利用酵母体内能够发生高频率同源重组的特点，采用CLONTECHSMART（Switching Mechanismat5’endofRNA Transcript）技术，以人脑总RNA为模板，通过逆转录和长距离PCR构建了酵母双杂交cDNA文库。

最后以CLONTECH MATCHMAKERSYSTEM3为操作平台，利用融合的方法对自行构建的人脑cDNA文库进行筛选，最终得到一个与人ryanodinereceptor2（RYR2）同源的基因和一个未知基因（HomosapiensmRNA；cDNADKFZp686C06106），由此推测TMEFF2基因胞内域中潜在的G蛋白激活模序可能与Ca2+或者酪氨酸蛋白激酶介导的信号转导通路相关。

此外，在克隆TMEFF2基因全长cDNA的过程中，研究者还意外地发现了一个新的TMEFF2剪接体序列。序列测定和分析表明，该剪接体缺失的长度为60bp的序列恰好构成TMEFF2基因的第7个外显子，由此推测该剪接体可能是在大脑mRNA的选择性剪接过程中形成的。有关该剪接体的功能及其在同一个体中所占的比例和在人群中的分布频率，尚有待进一步实验的证实。

还有研究表明TMEFF2有可能不是一种受体，而是一种膜结合的细胞因子，通过细胞与细胞间的相互接触传递信息。这是一种非常独特的作用方式，推测与细胞生长的接触抑制可能存在某种联系。而TMEFF2的甲基化则会使其表达降低，细胞失去接触生长抑制作用，从而导致肿瘤的发生。

[1]酵母双杂交文库构建与TMEFF2相互作用蛋白筛选[J].