细胞世界 » 讨论区 » 经验共享 » [讨论帖]正在养或已经养过HUVEC的请进

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 129  1/13 12345678910›››|
 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:[讨论帖]正在养或已经养过HUVEC的请进

milkdog[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 79280
精华 0
积分 500
帖子 719
信誉分 100
可用分 4366
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-9
状态 离线
1

发表于 2011-12-9 10:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[讨论帖]正在养或已经养过HUVEC的请进

[讨论帖]正在养或已经养过HUVEC的请进（转载）


有关细胞技术的热门话题——脐静脉内皮细胞


看到很多人跟我一样，培养脐静脉内皮细胞，很多新来的经常提重复的话题，于是将本站关于脐静脉内皮细胞的一些精华贴整理一下，方便大家查找。请在提出问题时，先到这些地方search一下，有没有你想要的。

cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/thread/1040078') 人脐静脉内皮细胞的培养
cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/67298_1.html') 脐静脉内皮细胞系
cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/67212_1.html') 脐静脉内皮细胞系与cd34?????

cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/thread/402526') 脐静脉内皮细胞培养建议
cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/thread/919688') 求教mutualhelp: 关于人脐静脉内皮细胞CRL-2480
cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/thread/1034515') 人脐静脉内皮细胞的培养
cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/thread/167303') 求帮助：脐静脉内皮细胞的迁移实验

cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/275131_1.html') 培养脐静脉内皮细胞的看过来！
cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/thread/304921') 紧急求救：培养脐静脉内皮细胞

人脐静脉内皮细胞的原代培养
1、 cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/thread/1528852')
2、 cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/thread/1523237')

cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/thread/1068904') 求助：关于脐静脉内皮细胞培养细节问题

cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/thread/983329') 请教脐带内皮细胞培养
cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/thread/291302') 求教静脉内皮细胞培养经验！！！！！

cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/thread/696194') ECV304和HUVEC又区别吗
顶部
阿敏[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74162
精华 0
积分 298
帖子 316
信誉分 100
可用分 2356
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-7
状态 离线
2

发表于 2011-12-9 10:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我一直培养HUVEC，但生长很慢，不知你们培养的情况如何。我的培养基中的ECGS为55UG/ML。这样的量还行吧？
顶部
milkdog[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 79280
精华 0
积分 500
帖子 719
信誉分 100
可用分 4366
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-9
状态 离线
3

发表于 2011-12-9 10:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #2 阿敏 的帖子

因为没有用过ECGS进行培养，所以不太清楚使用量，可以请青衫兄来解答一下。今天晚上给HUVEC传代，进行种植。不顺。在加胰酶前用培养基冲洗以后，发现细胞突然变圆。可能与培养基，以及细胞的量（今天70～80％）不足，还有冲洗力度有关。分析最大可能细胞量少，冲洗力量过大有关。
顶部
乌贼老弟[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74586
精华 0
积分 336
帖子 411
信誉分 100
可用分 2791
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-12
状态 离线
4

发表于 2011-12-9 10:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也有几点经验，请方家指正：

由于M199中含有的VC不多，而内皮细胞最易遭到氧化损伤，故在配置2~4周后的M199中应该添加VC，建议浓度10uM；
务必使用名牌血清，如Hyclone的标准胎牛血清；
为了控制平滑肌细胞及成纤维细胞的生长，可以适量添加肝素，如5u/ml；
如果没有使用胶原包被的瓶子，可使用一次性塑料培养瓶（Corning），内皮细胞通常能够很好地在新瓶子上贴壁，一个瓶子一般至少可以传3代。但是随着消化次数增加，细胞贴壁明显受到影响；
顶部
bohe221[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74583
精华 0
积分 419
帖子 457
信誉分 100
可用分 3228
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-12
状态 离线
5

发表于 2011-12-9 10:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我想问下，复苏HUVEC离心时，离心的速度与时间怎样的？实验室的老师建议我1000rpm 15~20分钟，文献上报道大多在5分钟左右。

可我上次复苏离心5分钟，细胞好像没下来都丢了。
顶部
铜雀[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76992
精华 0
积分 344
帖子 365
信誉分 101
可用分 2611
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-11
状态 离线
6

发表于 2011-12-9 10:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
一般离心10分钟是比较保险的，这样细胞团比较紧密，换液时不易破坏沉淀，也能将上清吸得比较干净。继续延长时间似乎没有好处。
顶部
milkdog[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 79280
精华 0
积分 500
帖子 719
信誉分 100
可用分 4366
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-9
状态 离线
7

发表于 2011-12-9 10:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #5 bohe221 的帖子

如果你离心之后肉眼没有看到细胞沉淀，那么说明离心程度不够（如果冻存时细胞很多的话）。复苏后细胞的生长状态与很多因素有关。如果一开始冻存没有做好，那么复苏后 细胞生长也很差劲。再就是离心时注意时间的计算，待转速达到所需时，开始记时。
顶部
yes4[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77377
精华 0
积分 764
帖子 1145
信誉分 101
可用分 6575
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-16
状态 离线
8

发表于 2011-12-9 10:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我一直培养HUVEC，但生长很慢，不知你们培养的情况如何。我的培养基中的ECGS为55UG/ML。这样的量还行吧？

==============================================================================================================

我觉得你的ECGS浓度有些低,我用的是SIGMA公司的ECGS,所用浓度为75UG/ML,另外血清也很重要,以前用的国产血清,贴壁及生长不大好,换用HYCLONE的胎牛血清,细胞生长状态还好!希望你能顺利!
顶部
园丁##[使用道具]
超级版主
Rank: 8Rank: 8


UID 74049
精华 0
积分 1981
帖子 3179
信誉分 101
可用分 16786
专家分 10
阅读权限 150
注册 2011-10-4
状态 离线
9

发表于 2011-12-9 10:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
也没有用过ECGS，都是用的是ECGF，不过两个的主要成分差不多的。呵呵！就是纯度的问题了。帮你查了查文献，看样子都是用的50ng/L（也就是50ug/ml），也有用高一些的，100ug/ml的。
另外，你做实验的可以看情况，要是细胞长得不好就多加点生长因子吧。不过，最好是用好点的胎牛血清。
顶部
911[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73229
精华 1
积分 523
帖子 682
信誉分 102
可用分 4276
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-20
状态 离线
10

发表于 2011-12-9 10:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我用的是SIGMA公司的ECGS，HYCLONE的特级胎牛血清，1640培养基，每三天换液一次，细胞培养了一个月仍不足80%，25cm2的瓶子，烦极了，老板要我快点做试验，但细胞数不够。什么方法可使细胞生长快些？
顶部
 129  1/13 12345678910›››|