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标题:[未解决]荧光定量PCR标准品的问题

  [未解决]本主题悬赏 可用分 10  
liujane97[使用道具]
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发表于 2011-12-13 21:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

荧光定量PCR标准品的问题

我自己用质粒做的标准品，可是做了几次PCR CT值都有变化怎么办，还有标准品在4度好，还是-20好，如果4度能保存多长时间

[ 本帖最后由 liujane97 于 2011-12-13 22:16 编辑 ]
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liujane97[使用道具]
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发表于 2011-12-13 21:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
还有我要同时测两个基因，怎样能保证两个基因的检测效率是相同的
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aa1380[使用道具]
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发表于 2011-12-14 17:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
-20度好，检查你的试剂，哪个公司的，质量如果。4度要尽快用，几天应该是可以的。
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unknow[使用道具]
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发表于 2011-12-14 17:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #2 liujane97 的帖子

只能通过分别做这两个基因的标准品对照了。
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liujane97[使用道具]
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发表于 2011-12-14 22:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我是做了两个标准品，可是斜率相差多少以内才能算是扩增效率一致呢？以前的文献只写要保证两个基因的扩增效率一致
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liujane97[使用道具]
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发表于 2011-12-14 22:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我是做了两个标准品，可是斜率相差多少以内才能算是扩增效率一致呢？以前的文献只写要保证两个基因的扩增效率一致
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nowait1983[使用道具]
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发表于 2011-12-15 10:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
有变化能变多少呀？阈值设定一致的么？
CT值有变化问题不大 关键是标准曲线质量如何 效率 相关系数
标准品还是分装了放-20吧
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shaust[使用道具]
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发表于 2011-12-15 10:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你的标准品稀释得准确么？
要不测一下质粒的浓度吧，如果稀释得不准确标准曲线不可能做得好的。
另外样品还是分装了放-20℃吧，做荧光定量加样要特别注意的，因为一般质粒浓度都很大，加样稍有偏差对结果都有很大影响。
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282850063[使用道具]
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发表于 2011-12-15 10:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
用什么稀释的标准品，好像有专门稀释标准品的solution
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xjz816[使用道具]
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发表于 2011-12-15 10:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你所说的CT值变化是指标准品的标准曲线的CT值变化吗？
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