液相色谱

最近做多西他赛系统适应性试验，样品买的美国usp的系统适应性对照，梯度洗脱，流动相：乙腈/水，具体如下：
时间T/min                  乙腈/%
      0                             28
      9                             28
     39                           72
     39.1                        28
     50                           28
柱子：C18柱，3.5um，150mm，流速：1.2mL/min，柱温：45℃
我用的5um，150mm的C18柱，其余条件都相同，可是在35min多出现一“大峰”，跑流动相也出现该“峰”，换柱子、换水、换机器都有这个“峰”，等度则没有，换其他梯度，也会在梯度完成之前出现类似峰或包，求高手帮忙分析下原因，想在年前把分析方法建好的，年后就没时间搞了，要毕业了，谢谢各位坛友！

样品溶解也是同样方法吗？
乙腈有问题，这也说不过去啊？
滤膜？

乙腈应该没问题，实验室都用乙腈的，试了过滤也是同样的问题

这个现象主要是几个因素引起的
1.水质，一般水质不好的时候，比如过期后长菌，会有杂峰。走平衡或高水相时，水中极性弱的杂质容易在色谱柱上累积，当有机相到达一定的比例时水中的杂质会相继出峰。
   a）水相要用0.45微米或0.22微米水相滤膜过滤。
b）购买未过期的娃哈哈纯净水，我们曾经用过，效果很好。
   b）使用超纯水仪，务必达到18.2MΩ（原水要质量好点的）。
2.仪器管路，水相管路长时间未清洗容易长菌。
3.仪器的在线过滤器及时更换。
4.流动相要进行脱气。（超声或在线负压）

如果发现杂峰比较大时，你可以多走几个溶剂看看有没有什么变化。等整个系统稳定了再进行分析。

今天买的娃哈哈试了啊，还是一样，流动相单独过滤，脱气，机子本身可以在线脱气，都不行啊，郁闷那

空白出峰？换水，换机器，换柱子都有这个峰？那只能是乙腈的问题了，还有，你多进几个样再试试

乙腈也没问题，最开始没过滤，高速离心的，今天试了过滤，还是一样的峰

洗脱了，基本没变化，就像是梯度本身引起的基线大漂移

很正常，走梯度经常会碰到这种情况。进样前走个空白，然后对照空白积分就行了。

有时候滤膜也会引入杂质，用前好好洗洗。

换一下默克的梯度洗脱专用乙腈就可以了，但是做实验还是要进空白样的！