细胞世界

这是我的流式图

1.我之前做了hochest33342荧光染色和DNA Ladder，结果都显示我的细胞是有凋亡的。而且细胞给药后有70%都变圆收缩，还有20-30%都漂了起来的哦！
2.没有用阳性对照哦，我下次找个阳性药测试的看一下哦
3.我的操作步骤是这样的：给药时间到了后，我是收集上清，再用胰酶-EDTA消化细胞（胰酶没有弃去，是直接加含FBS的培养基终止消化后吹打），两者的细胞加在一起离心1000rpm，5min，弃上清，再用PBS重悬洗两次，最后将细胞保存在1ml的PBS里面，拿去检测。（我从学校到送检的地方有两个小时，两个小时中细胞就保存在PBS里面，然后放在冰盒里，不知道这个时间的耽误有没有问题哦！等我送到检测的地方后细胞大部分都自然沉降在离心管底了。）

我是将细胞收集后保存在PBS里，送到检测的地方再加染料检测哦！我做的是AnnexinV/PI双染检测凋亡细胞，买的试剂盒里面只有AnnexinV和PI两种染料，不需要标记抗体吧？

.我之前做了hochest33342荧光染色和DNA Ladder，结果都显示我的细胞是有凋亡的。而且细胞给药后有70%都变圆收缩，还有20-30%都漂了起来的哦！
2.没有用阳性对照哦，我下次找个阳性药测试的看一下哦
3.我的操作步骤是这样的：给药时间到了后，我是收集上清，再用胰酶-EDTA消化细胞（胰酶没有弃去，是直接加含FBS的培养基终止消化后吹打），两者的细胞加在一起离心1000rpm，5min，弃上清，再用PBS重悬洗两次，最后将细胞保存在1ml的PBS里面，拿去检测。（我从学校到送检的地方有两个小时，两个小时中细胞就保存在PBS里面，然后放在冰盒里，不知道这个时间的耽误有没有问题哦！等我送到检测的地方后细胞大部分都自然沉降在离心管底了。）

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用含有EDTA的胰酶消化细胞，很有可能会降低Annexin-FITC的阳性率。另外PBS的PH值你测过没有？最好在7.4左右。