小中大34, S180肿瘤细胞
S180腹水型肿瘤细胞平时可以在小鼠腹腔中转种传代.我们科室保种时就这样的.
在有的试验时需在培养瓶中培养一段时间,由于其增殖较快,培养时密度不宜大,一般10*5/ml就够了;通常2天就需换一次液,由于其是悬浮细胞,无须消化,直接离心去上清,PBS洗涤,用含10%小牛血清的RPMI1640培养液就可以了.其要求条件相对较底,一般培养室都能达到.
我平时还养小鼠的淋巴细胞,我们养的是混合淋巴细胞,不是单一的细胞株(或系),主要特点是如果需要传代培养要加IL-2(出于经费考虑,我们就用人源IL-2,因为IL-2具有沿种系普向上约束性,而乡下无约束性)50~100u/ ml,换液时可以离心去上清,可以用PBS洗涤两一次,加入含10%小牛血清就可以了,其他注意事项同一般的培养.
35, 小鼠成肌细胞C2C12和人横纹肌肉瘤A204细胞的消化传代方法供大家参考:
1)细胞消化液的配制及存储:我采用的是0.25%Trypsin+0.05%EDTA的消化液,BUFFER采用的是D-Hank's液.配完后分装成4-5ml/tube,于-20度冰箱中储存.
2)消化前的处理:当细胞生长至亚融和状态需要传代时,提前半小时将配好的消化液放在细胞培养孵箱中预热,同时将配好的高压无菌的D-Hank's液也进行预热.
3)消化细胞:将预热的D-Hank's液洗细胞2次,2ml/25cm2,然后再加入预热的消化液,作用3-5min,并反复振荡,镜下观察.当细胞被消化成单个圆球状时,加入等体积的培养基中止消化,然后反复吹打,将消化后的细胞悬液,全部吸出后置于离心管中离心,1000rpm,10min.
4)传代接种细胞:离心完毕后,弃去上面的上清,加入新鲜预热的培养基,并计数,按要求接种的密度接种到新的培养瓶中即可.
这种方法的优点是:细胞消化彻底,损伤小,接种均匀,易于控制密度等.
36, hepa1-6和p19细胞
hepa1-6是小鼠肝癌细胞,p19细胞是小鼠畸形胎瘤细胞,前者须用10%胎牛血清的DMEN养,后者须用10%胎牛血清的FD养,且经常在传代初期出现生长状态不好,要反复洗涤后换液,多观察。
37, Ecv304细胞的培养
Ecv304细胞也很好培养.用含有10%小牛血清的DMEM培养,一般2-3天长到80%即可传代,传代是吸去培基,,用PBS冲洗,加入0.05%的胰酶+0.02%的EDTA,37度消化1分钟,加含有10%小牛血清的DMEM终止消化,吸管轻轻打散细胞,然后加培基放入37度二氧化碳培养箱中培养即可.
38, 小鼠肝癌H22体内传代的详细步骤:
1.腹腔种植小鼠肝癌H22细胞后第5-7天时,将小鼠颈椎脱臼处死,于75%酒精浸泡1-2分钟或腹部消毒。
2.于无菌条件下用5 号针头注射器抽取腹水,并置于10~50 ml离心管内,用生理盐水(NS) 10倍稀释,吸管充分吹打均匀,1 000 r/min-1离心5#ml 7 min,倾出上清,按一定比例加入生理盐水,配制成瘤细胞悬液5-10*10^7/ml,0.2 ml/只,接种到小鼠腹腔。
3.为简单起见,也可将抽取的腹水用生理盐水做简单稀释(1:2~1:4),0.2 ml/只,腹腔传代。
4.下次传代时,重复以上步骤即可。小鼠肉瘤S180腹腔体内传代同上。
39, H22小鼠肝癌细胞株
是腹水型细胞株,悬浮生长。液氮冷冻保存。使用时取出复苏,用1640加10%新生牛血清培养,三天后取液计数成1*108浓度,取0.08ml注入小鼠腹腔,7天左右腹水可用,一般要低速离心去掉巨噬细胞等混杂细胞,腹水得到的细胞比培养瓶中生长的细胞活力高,皮下接种成瘤率为100%。本法传代可靠性高,细胞活力强,致瘤率高。
40, 神经胶质细胞传代经验:
1、倒掉培养液,用D-HANKS洗两次
2、加入0.125%胰酶/0.02%EDTA(1:1),盖满瓶底为宜。
3、将培养瓶放置显微镜下进行观察,发现细胞间隙增大,突起回缩后竖起培养瓶,倒掉消化液。
4、用D-HANKS洗一次,此时动作要轻
5、加入完全培养液,轻轻吹打混匀,接种至培养瓶中。
注意:
1、0.125%胰酶/0.02%EDTA的PH值和温度重要,即PH值(7.5),温度
(37℃)
2、如果消化速度过快,细胞掉下来,也不要紧,加D-HANKS或完全培养液终止消化,离心1000r/min,10分钟即可
3、轻轻吹打
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