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标题:[讨论帖]MTT法和CCK-8法,那个好?

了了[使用道具]
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[讨论帖]MTT法和CCK-8法,那个好?

[讨论帖]MTT法和CCK-8法,那个好?


测定细胞毒性一直都使用经典的MTT法,近来同仁公司生产CCK-8试剂用于细胞毒性和增值测定,试剂介绍中比较了MTT法和CCK-8之间的优劣,不知道有没有人用过这两种方法,两个方法之间到底有什么不同,那个的精密度和准确度更高一些?
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tieshazhang[使用道具]
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请教:CCK-8是什么玩意儿?
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yes4[使用道具]
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最近在做这方面的实验,查了一些资料,希望可以对楼主有所帮助。
Cell Counting Kit-8简称CCK-8试剂盒,是一种基于WST-8的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。

Ø WST-8是一种类似于MTT的化合物,在电子耦合试剂存在的情况下,可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的formazan。细胞增殖越多越快,则颜色越深;细胞毒性越大,则颜色越浅。对于同样的细胞,颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。

Ø WST-8是MTT的一种升级替代产品,和MTT或其它MTT类似产品如XTT、MTS等相比有明显的优点。首先,MTT被线粒体内的一些脱氢酶还原生成的formazan不是水溶性的,需要有特定的溶解液来溶解;而WST-8和XTT、MTS产生的formazan都是水溶性的,可以 省去后续的溶解步骤。其次,WST-8产生的formazan比XTT和MTS产生的formazan更易溶解。再次,WST-8比XTT和MTS更稳定, 使实验结果更加稳定。另外,WST-8和MTT、XTT等相比,线性范围更宽,灵敏度更高。
该方法已被广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞增殖试验、细胞毒性试验以及药敏试验等。

总之,CCK-8的原理跟MTT其实是相同的,不同之处在于CCK-8法生成的formazan是水溶性的,不需要再吸出培养液加入有机溶剂溶解这个步骤,因此可以减少一定的误差。其他优点就是重复性优于MTT;对细胞毒性小;为1瓶溶液,毋需预制,即开即用。
但是CCK-8比MTT的价格要贵不少,所以一般来说,还是MTT法用的多。
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yychen[使用道具]
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同仁化学有CCK-8 不过还是MTT便宜啊
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ffooll[使用道具]
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CCK-8做细胞毒性实验,就很方便,加了CCK-8之后,过1-4小时后就可以直接读数,MTT加了之后,继续培养4小时,还要加DMSO溶解。CCK-8是MTT的优化版,都可以用。所测的结果是一致的。
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lixi559[使用道具]
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提供公司的网页给大家参考:cuturl('http://www.dojindo.cn/productd.asp?pd=82')
我也是做MTT屡受挫折,准备改用其他方法,也关注过CCK-8,不过后来定了罗氏的LDH试剂盒,晶美代理的,3800多啊,心疼中!
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定过PROMEGA的LDH,现在可能要1800,也比较贵,不过可以做10块板,稳定性稍稍比MTT好一些。罗氏的是不是比较好,价格这么贵?
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cck-8比mtt操作起来更方面,对于毒性测试,cck-8比mtt好很多,因为cck-8不破坏细胞,所以不影响实验。
悬浮细胞,操作时不需要离心,也就不会带走细胞
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薄荷侠[使用道具]
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不知道cck-8 有没有便宜一些,看到上海的一个公司,一个板需要300多,有点太奢侈
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这个以前讨论过的。

MTT:步骤有点烦琐,中间有吸液的步骤会造成不可避免发误差,特别是加DMOS前的一步,会吸走不少的结晶,后来改进了方法,用2%SDS-HCL溶结晶,不需要去培养基,但是必须37度过夜,耗时比较长。另外MTT反应,这一步,至少需要3小时,如果要做某个药物的急性作用,用这个方法就不太好了。
CCK-8:是MTT的改进,步骤简单,中间不需要吸出孔内的培养基,这样就减小了误差,另外CCK-8反应时间也短,最短1个小时就够了,特别适合做急性作用。还有CCK-8对细胞生长没有影响,测完细胞活性后,去掉含CCK-8的培养基,用新鲜培养基可以继续培养,并且还可以继续做其它指标的检测。MTT就不能。

具体可以看原来的帖子:
cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=66&id=5043649&tpg=1&ppg=1&sty=1&age=0#5043649')
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