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标题:[求助]原代培养 组织消化的问题

wu11998866[使用道具]
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发表于 2011-12-16 16:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

[求助]原代培养 组织消化的问题

[求助]原代培养 组织消化的问题


原代培养肺细胞，将肺组织剪成1mm3大小，然后用0.1％胰蛋白酶消化，放37度消化15－20min。但是消化液里的组织块还是那样大，好像没有被消化，但是颜色变白了。也试过消化时间延长至一个小时，但是组织块还是有很多，过筛网后，筛网上残留很多组织块。
是什么原因呢？是消化液的问题？还是我的操作的问题？
也试过在镜下观察消化的度，但是不清楚什么时候才是消化好了，我看到的镜下的细胞，有圆形的，也有其他的小的透亮的。不知道消化的度怎样掌握，盼解答，谢谢！
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园丁##[使用道具]
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发表于 2011-12-16 16:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
试试胶原酶吧. 胶原酶对付肺组织算得上专业对口. 胰酶消化对细胞损伤太大，不好控制.
我用0.2%的胶原酶，３７度消化至大部分组织消失，最好余留少部分组织. 细胞量很大，第二天就得传代.
此外，还可以试试组织块法. 组织块法永远都是最简单有效的方法.
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TAT[使用道具]
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发表于 2011-12-16 16:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问，如果需要肺泡2型上皮细胞，用胶原酶消化，也可以到组织块消失为止吗？
谢谢
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milkdog[使用道具]
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发表于 2011-12-16 16:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

胰酶中要加edta
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sunnyB[使用道具]
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发表于 2011-12-16 16:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢 请问加EDTA的浓度有什么特别要求吗？

另外，如果用胶原酶消化，用1型吗？浓度呢？

谢谢
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穿越时空[使用道具]
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发表于 2011-12-16 16:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #5 sunnyB 的帖子

我是0.25%的I型胶原酶，可以把组织消化至消失．获得的细胞主要是成纤维和内皮. 可能不符合你的要求．抱歉. 希望没有造成误导.
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dongdongqiang[使用道具]
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发表于 2011-12-16 16:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不明白的有一点是，肺组织去除血管啊什么的以后，消化后还存在内皮细胞啊？是圆形的吗？这个细胞我以前还从来没有考虑过～
我几次做出来的贴壁的都是圆形的细胞，第二天也不变成其他形状的，会不会是这种细胞？
那我怎么把这种细胞弃掉呢？我需要的是肺泡上皮细胞，我只知道用离心和贴壁的方法去除成纤维细胞

谢谢
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sunnyB[使用道具]
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发表于 2011-12-16 16:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
肺组织里毛细血管很多的．见下图(肺微血管内皮细胞) .
肺泡上皮细胞培养是怎样纯化的，我对此很好奇?


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发表于 2011-12-16 16:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


上图是内皮细胞？

我拟采用的是800r/min离心，取沉淀重悬，然后多贴壁几次。据文献说成纤维细胞比上皮细胞容易先贴壁。但是没有考虑内皮细胞的。

但是，问题是，我每次贴壁完了以后，细胞数就很少很少了，而且也是圆形的，不是文献报道的多角型的上皮细胞。
如果我少贴壁几次，细胞倒是有，但是看到的也是圆形的。觉得很纳闷，不知道为什么。
感觉如果是巨嗜细胞的话，应该没有我看到的细胞那样小。
望高手指点～～

谢谢
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sunnyB[使用道具]
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发表于 2011-12-16 16:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

差速贴壁分离成纤维和上皮细胞，太不可靠啦.
抱歉，对你的细胞一无所知，提不出什么有价值的意见.
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