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标题:[求助]请高手鉴定破骨细胞

fei1226com[使用道具]
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1
 

[求助]请高手鉴定破骨细胞

[求助]请高手鉴定破骨细胞



我最近做的破骨细胞照片
请高手鉴定
听说是多核的
我该用啥方法鉴定啊
多谢了


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fei1226com[使用道具]
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能看见是多核的吗?


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园丁##[使用道具]
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3
 

破骨细胞的鉴定可以分多种:这个是我在一篇论文中找的,具体你可以找一下论文!
1.形态学观察 破骨细胞是一类多核、体积大的巨细胞,在相差倒置显微镜下观察容易识别。细胞直径达30~100μm,含几个至数十个核。培养2小时后胞浆伸展,形态清晰,呈油煎蛋形、长条形、漏斗形、不规则形等

2)TRAP染色反应 抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)为破骨细胞的特异性标志酶,应用偶氮偶联组化分析法酶活性部位显示红色反应。以萘酚二磷酸盐为底物,偶氮副品红为显色剂,TRAP在酒石酸钾钠存在条件下将萘酚AS-BI磷酸盐水解为萘酚AS-BI,与显色剂结合形成红色沉淀

3)TrATPase染色反应 抗酒石酸酸性三磷酸腺苷酶(TrATPase)与破骨细胞质子泵功能有关,是破骨细胞骨吸收微环境酸化,发挥骨吸收所必需的酶。应用镁激活铅染色法,以ATP二钠盐为底物,硫化铵为显色剂,形成PbS棕黑色颗粒阳性反应,分布在胞浆中

4)降钙素受体测定 破骨细胞及其前体含有丰富的降钙素受体,结合位点>106/细胞。降钙素受体只在定向破骨细胞前体及成熟破骨细胞中表达,因而是反映破骨细胞分化的特异性标志,并是与巨噬细胞多核体的鉴别指标。应用免疫细胞化学染色法,经ABC试剂反应和显色反应,呈橙黄色阳性反应,苏木精复染后核呈淡蓝色

5)骨片吸收陷窝观察 骨吸收陷窝形成是破骨细胞的特异性功能标志,应用薄牛骨片(10~50μm薄)培养破骨细胞,经3天培养,有活性的破骨细胞在骨片上形成明显的吸收陷窝,基底粗糙不平、边界清晰,呈圆形或不规则形
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fei1226com[使用道具]
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对了
以上照片都是400倍的


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多谢斑竹关照


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上面的是瑞氏染色的片子


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贴壁后的照片


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感觉瑞氏染色的效果不好
有会做的高手帮忙指教一下
多谢了


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大家帮看看最上面的是刚从呱股骨和胫骨骨腔分离出来的细胞,血细胞比较多,后面几张是贴壁的,尤其是瑞氏染色的,能否看见多核状态?第一次做,实在迷茫,无从下手,请大家多多指点!感激不尽了!
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loli[使用道具]
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谈一下个人总结破骨细胞的内容,仅供楼主参考:

1 破骨细胞的发育来源
破骨细胞的发育来源较为明确,是造血干细胞分化为单核/巨噬细胞后在多种细胞因子 (TNF-a、RANKL、RANK、OPG、M-CSF、PGE2等)的调控下分化为成熟的具有多个细胞核的巨细胞 。

2 破骨细胞的鉴定
破骨细胞呈特异性的抗酒石酸的酸性磷酸酶染色阳性(TRAP+),F-actin染色阳性,表达降钙素受体、组蛋白酶K(cathepsin-k)、整合素αvβ3(integrinsαvβ3),内可以分解骨组织,体外培养可以在骨片、象牙或者人工骨组织培养板上可以形成吸收性陷窝。

3附上几篇关于破骨细胞鉴定的较为权威具体的文献

(1) Chambers, T. J. Regulation of the differentiation and function of osteoclasts. J. Pathol, 2000; 192: 4–13
(2) Boyle, W.J., Simonet, W.S. & Lacey, D.L. Osteoclast differentiation and activation. Nature, 2003; 423: 337–342
(3)Udagawa, N. Takahashi N, Akatsu T,et al. Origin of osteoclasts: mature monocytes and macrophages are capable of differentiating into osteoclasts under a suitable microenvironment prepared by bone marrow-derived stromal cells. Proc. Natl Acad. Sci. USA, 1990;87:7260–7264
(4) Lee SH, Rho J, Jeong D, et al. v-ATPase V0 subunit d2–deficient mice exhibit impaired osteoclast fusion and increased bone formation Nat Med. , 2006; 12:1403 - 1409
(5) Teitelbaum, S., L., and F. P. Ross. Genetic regulation of osteoclast developmentand function. Nat. Rev. Genet,2003;, 8: 638–649.
(6)Teitelbaum, S.L. Bone resorption by osteoclasts. Science,2000;289:1504–1508

4小鼠的破骨细胞TRAP+照片(×100)


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